[发明专利]一种基于核酸适配体的荧光传感器检测腺苷的方法

说明书

本发明公开了一种基于核酸适配体的荧光传感器检测腺苷的方法，该方法以适配体修饰的金纳米粒作为识别探针和能量受体，以适配体互补链修饰的碳点作为荧光探针和能量供体。通过杂交反应，金纳米粒和碳点之间发生荧光共振能量转移，检测体系的荧光发生猝灭，加入腺苷后，腺苷和适配体互补链竞争与适配体结合，使金纳米粒和碳点之间的能量转移效率减弱，检测体系的荧光恢复，基于这种荧光信号的变化实现腺苷的定量检测。本方法优点在于特异性强，操作简便，所需样品量少，灵敏度高的优点，能够用于血样中腺苷的测定，为临床诊断疾病提供有利分析数据。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及基于金纳米粒和碳点构建荧光适配体传感器用以检测腺苷的分析方法。

背景技术

腺苷是一种遍布人体细胞的内源性核苷，参与中枢神经系统及神经末梢的信号传导过程，调控脊髓运动模式的生成，具有抗缺血性神经保护作用，在调控机体各组织的生理活性和有机功能中均有发挥重要作用。与此同时，腺苷也是一种监测肺癌过程的生物标记物。目前检测腺苷的方法包括毛细管电泳，液相-质谱联用，高效液相色谱法等。这些方法一般都需要对样品进行复杂预处理，并且需借助大型仪器，操作繁琐，这些缺点在一定程度上限制了上述几种方法的应用。因此，发展一种简单灵敏高效的腺苷检测方法是十分必要的。

碳量子点(carbon dots,CDs)是一种直径小于10nm的离散准球形碳纳米粒子，其典型壳核结构包含含羧基或其他化学官能团的外壳和一个内部sp²杂化无定型或晶体石墨的核心。碳点作为一种新型的荧光纳米材料已被广泛应用于各个领域，然而目前大部分的荧光传感器都是基于“turn off”的原理进行分析检测，往往会受到样本基质的较大影响，进而影响传感器的灵敏度和选择性。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提供一种基于金纳米粒和碳点构建的荧光适配体传感器用以检测腺苷的分析方法。以适配体修饰的金纳米粒(aptamer-AuNPs)作为识别探针和能量受体，以适配体互补链修饰的碳点(ssDNA-CDs)作为荧光探针和能量供体，提供了一种高灵敏度高选择性的腺苷检测新方法。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

一种基于核酸适配体的荧光传感器检测腺苷的方法，包括如下步骤：

a)构建荧光适配体传感器：将适配体修饰的金纳米粒(aptamer-AuNPs)和适配体互补链修饰的碳点(ssDNA-CDs)按1:3:～3:1的体积比例混合，加入磷酸缓冲液，37℃孵育杂交构建荧光适配体传感器；

b)标准曲线的绘制：在步骤a)构建的传感器中，加入多个不同已知浓度的腺苷溶液使体系内腺苷浓度在0nmol/L～500nmol/L范围内，室温孵育20min～60min，测定各自的荧光强度值F，同时测定空白(腺苷浓度为0nmol/L)荧光值F₀，作相对荧光强度[(F-F₀)/F₀]与腺苷浓度对应的标准曲线；

c)荧光检测腺苷：在步骤a)构建的传感器中，加入未知腺苷浓度的溶液，测定其荧光强度值，根据步骤b)所述标准曲线得到待测溶液中腺苷的浓度。

其中，aptamer-AuNPs作为能量受体和识别探针，ssDNA-CDs作为能量供体和荧光探针，利用加入腺苷前后体系荧光信号的变化，实现对目标物的定量检测。腺苷核酸适配体(aptamer)序列为5’-SH-C₆-AGA GAA CCT GGG GGA GTA TTG CGG AGG AAG GT-3’，所述适配体互补链(ssDNA)序列为5’-NH₂-C₆-ACC TTC CTC CGC-3’。