[发明专利]一种酶解多肽及用于抑制小细胞肺癌干细胞侵袭和转移的用途

说明书

本发明公开了一种酶解多肽及用于抑制小细胞肺癌干细胞侵袭和转移的用途，以知了猴为原料，由如下方法制备：将知了猴洗净后绞成肉糜，置于超纯水中，加入碱性蛋白酶酶解，酶解条件为：pH值，8.3‑8.7；酶解温度，53‑57℃；酶解时间，9‑11小时；酶解结束后，加热使碱性蛋白酶灭活，冷却至常温；冷却后，8000‑10000rpm离心20‑30分钟，取上清，冷冻干燥得冻干粉；将冻干粉用超纯水溶解，用不同截留分子量的超滤膜对所得到的酶解多肽进行分离，将超滤所得组分冻干即得不同分子量大小的酶解多肽。本发明提供的酶解多肽有望开发成预防小细胞肺癌患者化疗后出现肿瘤转移的药物。

技术领域

本发明属于医药领域，涉及多肽药物的制备，具体涉及一种酶解多肽及用于抑制小细胞肺癌干细胞侵袭和转移的用途。

背景技术

肺癌是全球最常见的恶性肿瘤，死亡率居恶性肿瘤之首。我国肺癌发病率呈现逐年上升趋势，年平均增长近2％。肺癌根据病理学特点的不同分为多种组织类型，肺癌组织类型不同，其治疗措施也不同。根据2004版WHO分类，常见肺癌组织病理学分型分为非小细胞癌(NSCLC)和小细胞癌(SCLC)。非小细胞癌又分为鳞状细胞癌(SCC)、腺癌(AC)和大细胞癌(LCC)。不同肺癌临床治疗方案不同，预后效果也不同。因此，为了提高治疗效果，肺癌的治疗策略已经从传统的以分期为基础的治疗模式转变为以组织学类型和基因突变为指导的个体化、精准的多学科治疗模式。个体化治疗提高了肺癌的治疗和预后效果。

小细胞肺癌占肺癌总数的20％-25％，对化学治疗及放射治疗敏感，但易复发和发生远处转移，文献报道局限期小细胞肺癌的5年生存率为7％，广泛期仅为1％。近几年提出的肿瘤干细胞学说认为，在大部分肿瘤中潜伏着的极少量肿瘤干细胞是肿瘤复发和转移的根源。

生物活性肽(Biologically active peptides,BAP)是一种具有特殊生理功能的小分子活性物质，如抗肿瘤、抗菌、抗高血压、抗病毒以及提高免疫力等，这些物质广泛存在于动物、植物以及微生物中。生物活性肽主要有4种来源，分别为蛋白酶解多肽、微生物发酵代谢多肽、天然活性多肽以及化学合成多肽。

由于近几年来恶性肿瘤发病率的不断提高，而传统的化疗药物不仅毒副作用大而且治疗效果并不理想，因此，生物活性肽凭借其活性高、副作用小、针对性强的优势得到了国内外科研工作者的研究和关注。目前已经从多种生物中提取得到了抗肿瘤活性肽，其中动物来源的活性肽展现了广阔的前景。Hsu等分别用木瓜蛋白酶和蛋白酶XXⅢ酶解金枪鱼肉，分离纯化后得到了两种抗肿瘤活性较好的多肽(Antiproliferative activity offish protein hydrolysates on human breast cancer cell lines.ProcessBiochemistry,2006,41:1217-1222)。这两条多肽对乳腺癌细胞MCF-7的IC50值达到了8.1和8.8μM。Leng等人通过SephadexG-25、FPLC并结合MALDI-TOF成功的从壳蛤中分离出了对胃癌细胞BGC-823有明显抑制作用的分子量为3147u活性肽，当肽的浓度为4.0μg/mL时其对癌细胞的抑制率达到了60％(Inhibitory effects of anticancer peptide fromMercenaria on the BGC-823 cells and several enzymes.FEBS Letters,2005,579:1187-1190)。另外还分别从贻贝、泥蚶、海鞘、牡蛎等动物体内得到了抗肿瘤肽，这些都为以后动物体内抗肿瘤肽的提取奠定了基础。

知了猴又称知了龟、爬蚱等，是金蝉的成熟若虫，蛋白含量非常高，具有较高的食用和药用价值。然而，目前对于知了猴多肽的提取、分离纯化及抑制小细胞肺癌干细胞侵袭和转移方面的研究鲜有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酶解多肽及用于抑制小细胞肺癌干细胞侵袭和转移的用途。

上述目的是通过如下技术方案实现的：