[发明专利]一种检测ALDH2基因突变的探针及其应用和试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测ALDH2基因突变的探针及其应用和试剂盒，属于基因检测技术领域。其包括SEQ ID NO.1所示的检测探针，以及SEQ ID NO.2‑3所示的捕获探针中的一种或两种。该探针可针对ALDH2基因的rs671位点的G→A突变进行检测，其具有检测灵敏度高、特异性强、假阳性率低等特点。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体而言，涉及一种检测ALDH2基因突变的探针及其应用和试剂盒。

背景技术

乙醛脱氢酶(Acetaldehyde Dehydrogenase，ALDH)由ALDH基因编码，可分为ALDH1A1、ALDH1B1和ALDH2。其中，ALDH2在人体内把乙醛催化成乙酸的能力最强。ALDH2基因位于第12号染色体(12q24)，由13个外显子构成，编码的酶蛋白肽链由500个氨基酸残基组成。研究表明，该基因的多态性在亚洲人群中很常见，并且可能影响人群的饮酒行为。ALDH2与亚洲人群最为密切的是ALDH2基因的rs671位点G→A突变，可导致其编码的多肽链谷氨酸(Glu)变为赖氨酸(Lys)。ALDH2基因与酒精在人体内的分解代谢有关，还参与硝酸甘油的代谢。

饮酒后吸收进入体内的乙醇，主要在肝脏进行代谢。乙醇被氧化成乙醛后，95％在肝脏变成乙酸，余下5％在其他组织及血液被代谢掉。乙醇在体内代谢产物是乙醛，是导致酒精性肝病的主要原因。由于ALDH2G(ALDH2*1)的基因序列发生突变形成ALDH2L(ALDH2*2)等位基因，二者随机组合可编码形成ALDH2GG、ALDH2GL或ALDH2LL，3种基因型。ALDH2*1/ALDH2*1基因型(野生型)的饮酒者，体内把乙醛氧化成乙酸能力很强，对乙醇耐受性高，可以过量饮酒，但应适当节制。ALDH2*1/ALDH2*2基因型(突变型杂合型)的饮酒者，血液中乙醛的浓度是前者的6倍，对酒有一定的耐受性，可以适量饮酒。ALDH2*2/ALDH2*2基因型(突变型纯合型)的饮酒者血液中乙醛的浓度是前者的19倍，对酒敏感，没有耐受性，饮酒后很快出现严重不适现象。大量乙醛滞留在体内，除了损伤肝脏导致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌，还与增加食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等风险相关。

硝酸甘油作为抗心绞痛的经典药物，已有多位学者对其生物转化机制进行了广泛研究，2002年Chen等发现在巯基化合物参与下，ALDH2能够催化硝酸甘油生成1，2-二硝酸甘油和亚硝基硫醇，之后ALDH2在硝酸甘油代谢中的重要作用引起越来越多学者的关注。研究发现，ALDH2*1/ALDH2*1基因型(野生型)具有ALDH2的正常活力，ALDH2*1/ALDH2*2基因型(突变型杂合型)存在6％的酶活力，而ALDH2*2/ALDH2*2基因型(突变型纯合型)则完全丧失酶的活力，使硝酸甘油无法产生一氧化氮，难以发挥药效。

ALDH2除了与酒精性肝病等消化道疾病息息相关外，还与其他一些疾病相关，如消化道肿瘤、白血病、帕金森病(PD)等。

ALDH2位点的多态性为先天遗传，与任何疾病的发生无关，与年龄无关。研究表明，ALDH2*2在人类各族群中的分布是不同的，亚洲人种出现频率较高。中国汉族ALDH2*2的频率为15.5％，墨西哥1.0％，日本人23.8％，欧洲人0％，南非人0％。中国人群中广东汉族最高，达31％，武汉汉族12％，洛阳人15％，上海人25％，台湾人30％。此外，ALDH2各基因型的发生率在男女性别上差异无统计学意义。

综上所述，ALDH2基因多态性检测将为硝酸甘油的用药、饮酒指导及相关高风险疾病的提示提供有效的参考依据，具有重要的临床应用意义。目前，用于ALDH2基因分型的方法有以下几种，各有其特点。

1.限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术(PCR-RFLP)