[发明专利]一种可视化金黄色葡萄球菌检测用纳米探针及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于细菌检测材料领域，具体涉及一种可视化金黄色葡萄球菌检测用纳米探针及其制备方法。

背景技术

目前，细菌的检测通常采用PCR进行，比较费时费力。由于金黄色葡萄球菌是比较强的致病菌，因此在食品或者一些特殊生活工作环境中，对其进行检测是必不可少的。

近些年来，可视化检测由于其方便性，日益受到研究者的青睐。

纳米金具有许多用途，其中包括对微生物的检测，如鲁卫平等将单顺丁烯二乙酰亚胺修饰的纳米金标记于致病菌的核酸分子上，并通过金标银染技术实现信号放大，实现对一些致病菌的检测。

不过，专门针对危害性较高的金黄色葡萄球菌的检测用可视化纳米金探针的研究还非常的少。

因此，如何构建一种可视化金黄色葡萄球菌检测用纳米探针的制备方法是本领域较为值得研究的方向。

发明内容

在上述技术背景的基础上，本发明的目的之一在于提供一种解决现有技术技术问题的一种可视化金黄色葡萄球菌检测用纳米探针的制备方法，目的之二在于提供这种制备方法制备得到的纳米探针。

上述制备方法包括如下步骤：

（1）利用柠檬酸和单宁酸制备金纳米粒子，所得金纳米粒子的粒径为20~30nm；利用再将所得金纳米粒子置于二水合双 ( 对 - 磺酰苯基 ) 苯基膦化二钾盐溶液中反应；

（2）将如下三种DNA与步骤（1）所得物进行混合：

5’-SH-TTT TTC TAC CGG TAC ATG GAC AGT ATG TCT TTC CAT ACT TGC ATG TCA CAG CGC-3’;

5’-SH-TTT ATC TAC AGG CAC ATG TAC AGT ATG TCT TTC CAT ACT GTA AGT TGA CAG CGG-3’;

5’-SH-TTT CTC TAC AGG CGC ATG TAC GGA ATG TCT TTC CAT ACT TTC AGT GAA CAG CCC-3’

混合后，于37℃中孵育，然后加入SDS，震荡后加入浓度为0.3~0.4mol/L的NaCl溶液，于37℃中进行陈化处理，离心后去掉上清去除多余DNA，沉淀用PBS重悬。

所述二水合双 (对-磺酰苯基) 苯基膦化二钾盐溶液的浓度为20mg/mL。

所述孵育的时间为24h。

所述陈化的时间为24h。

本发明的技术优点：

利用本发明方法，仅需收集样品并进行DNA提取，然后利用本发明所得探针对所得DNA进行检测，如存在金黄色葡萄球菌，则探针溶液将显示紫色。因此，可以首先快捷的获得定性测量，然后，利用使用电化学循环伏安法可以得到检测限，并建立标准曲线进行定量检测。

本发明的主要优势在于检测限较宽，最低检测限可达 1×10^-14 mol/L（3 S/N）。

具体实施方式

以下结合实施例进一步对本发明进行说明，值得一提的时，下述实施例仅仅起到示例作用，并非旨在对本发明有所限定，本领域的技术人员应该理解，凡是符合本发明精神的技术方案均属于本发明的保护范围。

实施例1

探针的制备：

（1）利用柠檬酸和单宁酸制备金纳米粒子，所得金纳米粒子的粒径为20~30nm；利用再将所得金纳米粒子置于二水合双 ( 对 - 磺酰苯基 ) 苯基膦化二钾盐溶液中反应；

（2）将如下三种DNA与步骤（1）所得物进行混合：

5’-SH-TTT TTC TAC CGG TAC ATG GAC AGT ATG TCT TTC CAT ACT TGC ATG TCA CAG CGC-3’;

5’-SH-TTT ATC TAC AGG CAC ATG TAC AGT ATG TCT TTC CAT ACT GTA AGT TGA CAG CGG-3’;

5’-SH-TTT CTC TAC AGG CGC ATG TAC GGA ATG TCT TTC CAT ACT TTC AGT GAA CAG CCC-3’

混合后，于37℃中孵育，然后加入SDS，震荡后加入浓度为0.3mol/L的NaCl溶液，于37℃中进行陈化处理，离心后去掉上清去除多余DNA，沉淀用PBS重悬。

所述二水合双 (对-磺酰苯基) 苯基膦化二钾盐溶液的浓度为20mg/mL。

所述孵育的时间为24h。