[发明专利]用于皮肤型人乳头瘤病毒分型检测的核酸序列及其应用

说明书

本发明属于微生物检测领域，尤其涉及用于皮肤型人乳头瘤病毒分型检测的核酸序列及其应用。所述的30对引物可用于制备快速检测皮肤型HPV型别的诊断产品，例如试剂盒等。该核苷酸序列可以快速的、精确的检测出皮肤型HPV的型别，能够满足临床上对皮肤型HPV分型检测的需要。

技术领域

本发明属于微生物病原检测领域，尤其涉及用于皮肤型人乳头瘤病毒分型检测的核酸序列及其应用。

背景技术

人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。表现为寻常疣、生殖器疣（尖锐湿疣）等症状。随着性病中尖锐湿疣的发病率急速上升和宫颈癌、肛门癌等的增多，人乳头瘤病毒（HPV）感染，越来越引起人们的关注。

HPV广泛的存在于自然环境之中，与人类的健康息息相关，人们开始探索越来越多的HPV相关疾病。目前已分离出200多种HPV，不同的型别能够引起不同的临床表现，不同的HPV型别所导致的疾病不同，疾病的预后也不同，甚至同一疾病的临床表现，也因感染型别不同而略有区别，检测出患者感染的具体型别，对于疾病的筛选和诊断、疾病的治疗和预后有着极大的帮助。

HPV与多种皮肤黏膜疾病相关，其中包括良性和恶性的增生病变。可引起数种皮肤型疾病，例如良性皮肤疣，日光性角化病（AKs）和非黑素瘤皮肤癌（NMSCs）。在健康人的皮肤上也常常检出皮肤HPV型别，皮肤型HPV感染中最常见的疾病即为皮肤疣类疾病，可分为寻常疣、跖疣和扁平疣这三大类，不同的HPV型别感染可导致不同的皮肤疣疾病的发生。寻常疣多由HPV1、2、4型感染引起，HPV2型别可能是引起人群手、足寻常疣的最常见型别；扁平疣则多由HPV3、10、28引起；不同的HPV型别引起的皮肤疣临床表现都略有不同，例如角化程度的不同；HPV的感染具有显著的地域差异，通过对本地区患者HPV感染型别的检测，结合对治疗效果的分析，从而对推动皮肤疣个体化治疗方案的实施提供分子流行病学依据。但是目前绝大部分的HPV检测方法是针对黏膜型HPV，缺乏一种成熟的可应用于临床的皮肤型HPV检测方法和核酸序列。

综上所述，为了满足临床中对HPV的分型检测需要，亟需研究一种实用、准确、特异和灵敏的检测方法。

发明内容

针对上述问题，本发明提供用于皮肤型人乳头瘤病毒分型检测的核酸序列及其应用，该核苷酸序列可以快速的、精确的检测出皮肤型HPV的型别，能够满足临床上对皮肤型HPV分型检测的需要。

为了实现上述目的，本发明提供的用于分型检测皮肤型人乳头瘤病毒的核酸序列具体为可用于分型检测30种皮肤型别的人乳头瘤病毒的30对引物核酸序列。

设计并筛选引物核酸序列：首先对各皮肤型别HPV的 L1区段进行对比，选取差异较大的部分进行设计引物核酸序列，每一型别设计3-10对候选引物；然后分别以本团队人工合成的标准病毒核酸(Genbank 序列号，见表1)，以及大量HPV感染的临床生物样本为模板，使用上述多对候选引物进行大量反复的多聚酶链反应，对得到的产物进行测序，验证扩增的特异性与灵敏性；最终得到特异性与灵敏性俱佳的30对引物，引物的核苷酸序列如SEQID No：1至 SEQ ID No：60。

所述的30对引物的核苷酸序列及其对应检测的HPV型别，见表2。

表1 标准病毒核酸序列的Genbank 序列号。

表2 30种检测皮肤HPV型别的引物核苷酸序列。