[发明专利]一种人类微卫星不稳定性MSI检测扩增引物组合物及试剂盒

说明书

技术领域

本发明生物技术领域，具体地涉及一种人类微卫星不稳定性MSI检测扩增引物组合物及试剂盒。

背景技术

微卫星是广泛分布于人类基因组中单个、两个、三个甚至更多个的串联重复核苷酸序列。微卫星不稳定性MSI的产生是由于DNA错配修复系统(MMR)缺陷导致的微卫星序列丢失或增加，出现新的微卫星等位基因，它与MMR基因的异常相关。临床研究表明：微卫星高不稳定性(MSI-H)的Ⅱ期结直肠癌患者预后较好，但不能从氟尿嘧啶单药辅助化疗中获益；MSI检测有助于辅助诊断遗传性非息肉病性结直肠癌HNPCC(林奇综合征)。实验室常用的MSI检测方法：荧光多重PCR片段分析法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人类微卫星不稳定性MSI检测扩增引物组合物及试剂盒。

本发明提供的技术方案如下：

一种人类微卫星不稳定性MSI检测扩增引物组合物，包括检测如下位点的引物对：

NR-24-F:5’-GCTGAATTTTACCTCCTGACT-3’(SEQ ID NO.1)

NR-24-R：5’-CGGAGATTGTGCCATTGCA-3’(SEQ ID NO.2)

BAT-25-F：5’-CGCCTCCAAGAATGTAAGTG-3’(SEQ ID NO.3)

BAT-25-R：5’-TTCTGCATTTTAACTATGGCTCT-3’(SEQ ID NO.4)

CAT-25-F：5’-TTATTGTTTTCAACCTAGAAACC-3’(SEQ ID NO.5)

CAT-25-R：5’-CAGTGAGCTGAGATCGTG-3’(SEQ ID NO.6)

BAT-26-F：5’-CTTATCAGATGATTCCAACTTTG-3’(SEQ ID NO.7)

BAT-26-R：5’-GCTTCTTCAGTATATGTCAATGA-3’(SEQ ID NO.8)

MONO-27-F：5’-GAGACAGAGCAAGACTCT-3’(SEQ ID NO.9)

MONO-27-R：5’-GTTCTGTCTCCTTTCTTAAGG-3’(SEQ ID NO.10)

Penta D-F：5’-GAGCCTGGAAGGTCGAA-3’(SEQ ID NO.11)

Penta D-R：5’-GAAATATTTGCCTAACCTATGGTC-3’(SEQ ID NO.12)

Penta E-F：5’-GACTGAGCAAGACTCAGTCT-3’(SEQ ID NO.13)

Penta E-R：5’-GATTACATAACATACATGTGTGTAAA-3’(SEQ ID NO.14)

本发明的又一技术方案为：

一种人类微卫星不稳定性MSI检测扩增体系，包括前述的扩增引物组合物。

本发明试剂盒由荧光标记特异性引物、PCR缓冲液、核苷酸单体(dNTPs)等成分组成，以荧光多重PCR技术为基础，检测人类细胞中微卫星不稳定性MSI状态。试剂盒含有7对荧光标记特异性引物，分别扩增5个单核苷酸重复标志物和2个五核苷酸重复标志物(详见表1)。5个单核苷酸重复标志物分别为NR-24、BAT-25、CAT-25、BAT-26、MONO-27，这些标志物均为准单态性，即群体中几乎所有个体该位点为同一等位基因纯合状态。2个五核苷酸重复标志物为Penta D和Penta E，具有较高的多态性和较低的微卫星不稳定性，用于判断肿瘤组织和正常组织是否来源于同一个患者。PCR扩增产物用ABI3500Dx基因分析仪进行毛细管电泳分离，结果数据用GeneMapper软件分析确定微卫星不稳定性状态。

本发明的试剂盒优点如下：

1、所需样本量少，可同时检测五个单核苷酸标志物变异情况，定性检测微卫星不稳定性状态；

2、带有质控样本是否来源于同一患者的两个五核苷酸重复标志物，避免样本混淆错误；

3、操作简便，结果判读客观简单。

附图说明

图1为使用本发明试剂盒微卫星稳定性(MSS)样本BAT-25与Penta D标志物毛细管电泳图；

图2为使用本发明试剂盒微卫星稳定性(MSS)样本MONO-27、CAT-25与BAT-26标志物毛细管电泳图；