[发明专利]96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法

说明书

本发明公开了一种96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法，包括以下步骤：南极磷虾肌肉组织经预处理，得南极磷虾粉；在南极磷虾粉中加入有机溶剂Ⅰ后混合均匀，冰浴超声提取，然后加入水震荡离心，待溶液分层后移取下清液；先将下清液减压干燥，然后用有机溶剂Ⅱ复溶后，得到南极磷虾磷脂粗提液；使用有机溶剂Ⅲ水溶液活化96孔板固相萃取板，经南极磷虾磷脂粗提液上样、有机溶剂Ⅲ水溶液淋洗、有机溶剂Ⅳ或有机溶剂Ⅳ水溶液洗脱后，得到纯化后的磷脂酰胆碱提取物。

技术领域

本发明涉及物质分离技术领域，特别是涉及提取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法。

背景技术

南极磷虾(Euphausia superba)是一类生活在南大洋中的甲壳类浮游动物，其具有生物蕴藏量大、分布广等特点，是重要的战略性海洋新资源。据估计，南极磷虾贮藏量有6.5～10亿吨之巨，最大耐受捕捞量约为400～600万吨。南极磷虾是南极海域生态系统的重要环节，近几年受到广泛关注。各国科研机构开展了南极磷虾精深加工技术，在食品、药品、保健品等领域进行了大量研究，是近年来的热点研究课题之一。研究发现，南极磷虾营养价值高，富含蛋白质、脂质、矿物元素，以及酶类、类菌孢素氨基酸、虾青素等活性物质，具有降低胆固醇、预防老年痴呆症、预防动脉硬化、抗炎症、保护视力、及改善大脑学习机能等生理功能。目前国内外对南极磷虾的研究主要围绕蛋白质、脂肪酸、消化酶、矿物元素等组分，而针对南极磷虾中磷脂酰胆碱96孔板固相萃取研究国内外尚未见报道。

磷脂是一类含有磷酸的脂类，磷脂结构主要由甘油骨架、极性基团和不同长度和饱和度的脂肪酸链组成。根据磷脂极性基团不同，可将磷脂分为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇等类别。生物体中存在的磷脂种数以千计，结构多样、种类复杂，具有独特的化学结构。磷脂是组成细胞膜的主要物质，是磷脂双分子层的基础物质，常见的有磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺等。磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholin,PC)又称卵磷脂，是生物生长所需的最重要的磷脂之一，也是人体获得胆碱的重要途径。研究发现，磷脂酰胆碱在增强记忆、降脂降胆固醇、修复肝细胞以及抗疲劳等生理功能，并且在治疗阿兹海默症方面有一定效果。

复杂样品基质中磷脂酰胆碱的全面提取是脂质组学研究的关键步骤之一，也是当前限制产业发展的技术难题之一。传统提取方法在提取磷脂酰胆碱的同时容易引入小分子杂质，特异性不强，且通量小，样品需要逐个提取，提取效率低。目前现有的从生物中提取磷脂酰胆碱的方法为：溶剂萃取法。该方法采用有机溶剂从固体或者液体样品中萃取磷脂酰胆碱，该方法一方面提取专一性不高，提取磷脂酰胆碱的同时容易共萃取其他杂质；另一方面处理步骤繁琐，操作复杂，通量低，当待测样品量大时需要消耗大量人力物力。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法；该方法将液液萃取、96孔板、固相萃取有效结合，高纯度提取南极磷虾中的磷脂酰胆碱，通量高，可一次性同时提取96个样品，从而解决了现有技术中存在的提取效率低、特异性差、产品质量不高、南极磷虾加工利用程度低等问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法，包括以下步骤：

1)、原料预处理：

取南极磷虾肌肉组织(新鲜的南极磷虾肌肉组织)，洗净后研磨成糜，再真空干燥后粉碎成粉末，得南极磷虾粉；

2)、粗提液制备：

在南极磷虾粉中加入有机溶剂Ⅰ后混合均匀，冰浴超声提取，然后加入水震荡离心，待溶液分层后移取下清液；先将下清液减压干燥，然后用有机溶剂Ⅱ复溶后，得到南极磷虾磷脂粗提液；