[发明专利]96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法

权利要求书

1.96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法，其特征是包括以下步骤：

1)、原料预处理：

取南极磷虾肌肉组织，洗净后研磨成糜，再真空干燥后粉碎成粉末，得南极磷虾粉；

真空干燥至含水率≤5％；

粉碎至粉末能过80～100目筛；

2)、粗提液制备：

在南极磷虾粉中加入有机溶剂Ⅰ后混合均匀，冰浴超声提取，然后加入水震荡离心，待溶液分层后移取下清液；先将下清液减压干燥，然后用有机溶剂Ⅱ复溶后，得到南极磷虾磷脂粗提液；

所述有机溶剂Ⅰ为甲醇：氯仿＝1：2体积比的混合液，南极磷虾粉与有机溶剂Ⅰ的料液比为1g/25～35ml；所述水的用量为有机溶剂Ⅰ的0.5～1体积倍；所述有机溶剂Ⅱ为甲醇，南极磷虾粉与有机溶剂Ⅱ的料液比为1g/8～12ml；

震荡离心为于12,000±1000rpm/min的速度、4±0.5℃的温度下高速冷冻离心5±1分钟；

3)、96孔板固相萃取：

96孔板固相萃取板的每个孔中的填料为25mg的二氧化锆；

使用有机溶剂Ⅲ水溶液活化96孔板固相萃取板，经南极磷虾磷脂粗提液上样、有机溶剂Ⅲ水溶液淋洗、有机溶剂Ⅳ水溶液洗脱后，得到纯化后的磷脂酰胆碱提取物；

有机溶剂Ⅲ水溶液是体积浓度5％的乙腈；

有机溶剂Ⅳ水溶液为体积浓度90％的乙腈；

淋洗和洗脱时的流速均为0.6mL/min。

2.根据权利要求1所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法，其特征是：该方法还包括下述步骤4)；

4)、浓缩干燥：

将步骤3)所得的纯化后的磷脂酰胆碱提取物于10～25℃、0.7～0.1Mpa下进行低温减压浓缩，得到南极磷虾磷脂酰胆碱浓缩液。

3.根据权利要求1或2所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法，其特征是：

所述步骤2)中，以移取下清液后的残渣替代南极磷虾粉，以有机溶剂Ⅰ中的氯仿替代有机溶剂Ⅰ；再重复提取1～3次；

合并所有提取步骤所得的下清液再减压干燥，然后用有机溶剂Ⅱ复溶后，得到南极磷虾磷脂粗提液。

4.根据权利要求3所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法，其特征是：

所述步骤2)中，

每0.1～1g的南极磷虾粉，对应的超声功率为200W，冰浴超声提取30±5min。

5.根据权利要求3所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法，其特征是：

所述步骤2)中，用有机溶剂Ⅱ复溶后过0.22μm有机膜，得到南极磷虾磷脂粗提液。