[发明专利]一种利用抑菌培养基培育茶树的组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种利用抑菌培养基培育茶树的组培方法，属生物技术领域。

背景技术

茶树(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)属山茶科山茶属多年生常绿木本植物，茶叶是世界上三大无酒精饮料之一。近年来，随着茶产业的不断发展，茶叶生产中对优良茶树新品种的需求越来越迫切。利用生物技术进行组培快繁具有繁殖系数高，最大限度地保持品种的遗传稳定性和无性系快繁能力等优点，在茶叶生产中具有广阔的应用前景,

虽然传统育种方法已培育出了产量高和品质优的茶树品种，但生产上仍缺乏高茶氨酸、高茶多酚和低咖啡碱等符合人们消费需求的优异品种。这主要是因为茶树基因的高度杂合性，传统的茶树育种年限长、难度较大。植物离体再生技术的日益成熟和基因工程技术的不断发展，为茶树品种创新开辟了新的途径。基因工程技术的应用需要建立高频率的遗传转化体系，而高频率的遗传转化体系又依赖于高频率的再生体系。

茶树组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的茉莉花组织培养方法要求外植体接种在高温高压灭菌后的无菌培养基中才能正常生长，耗能大，人工操作成本高。如果能通过药物抑菌的方法来改造培养基，使培养基在不需要进行高温高压灭菌，就能够获得茶树的正常生长。然而，针对不同的植物品种要想找到一种合适的抗菌剂是比较困难的，往往是当培养基抗菌时，植物组织的生长就受到抑制；而植物组织正常生长，就无法获得满意的抗菌效果。其原因一是还没有一种抗生素对所有的菌类都有效，而且药效期短；二是有些抗菌素、防腐剂在有效的浓度下，其杀菌、抗菌离子对植物组织直接产生伤害，有些则产生盐害。必须选择与植物组织亲和、友好，药效期长(至少一个生长周期)，不产生盐害并具有杀菌、抗菌活性的物质作为抗菌剂。因此，筛选合适的抗菌药剂是开放组培技术得以应用的关键。

本发明为茶树组织培养提供一种抑菌培养方法。一方面可以降低茶树组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用抑菌培养基进行茶树组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制组织培养过程中的污染问题，又不会对茶树生长产生毒害或抑制，即不影响茶树的正常生长，从根本上简化了茶树组织培养。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用抑菌培养基培育茶树的组培方法。

本发明的目的是通过以下方法实现的。

本发明的一种利用抑菌培养基培育茶树的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；

2.培养基配制：诱导培养基为：MS+1～3mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L IBA+40～100mg/L次氯酸钠+5～10mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：MS+1～2mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L IBA+0.5～2mg/L GA3+40～100mg/L次氯酸钠+5～10mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为：1/2MS+1～3mg/L IBA+40～100mg/L次氯酸钠+5～10mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS，为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄氨基嘌呤；所述IBA，指α-吲哚丁酸；所述GA3，指赤霉素；配制培养基时，先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉，加培养基总重量1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；