[发明专利]一种基于Au@Ag异质结纳米棒的玉米赤霉烯酮免疫传感器的构建

权利要求书

1.一种基于Au@Ag异质结纳米棒的玉米赤霉烯酮免疫传感器的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）用Al₂O₃抛光粉打磨直径为4 mm的玻碳电极，超纯水清洗干净；将6 µL 1.0~1.6 mg/mL Au纳米颗粒杂化氨基化CeO₂-CuO纳米棒CeO₂-CuO-NH₂-Au NPs分散液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；

（2）依次滴加6 µL 1~5 µg/mL的玉米赤霉烯酮抗体anti-ZEN，3 µL 质量分数为0.5% ~2%的BSA溶液到电极表面，超纯水洗净，室温下晾干；

（3） 滴加6 µL 10^-4~100 ng/mL的一系列不同浓度的玉米赤霉烯酮到电极表面，孵化2h，超纯水冲洗，室温下晾干；

（4）滴加6 µL Au@Ag异质结纳米棒负载硫堇Th的二抗标记物Au@Ag@Ab₂@Th于步骤（3）所得到的电极的表面，超纯水冲洗，室温下晾干，制得一种夹心型免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种基于Au@Ag异质结纳米棒的玉米赤霉烯酮免疫传感器的构建方法，其特征在于，所述的Au纳米颗粒杂化氨基化CeO₂-CuO纳米棒CeO₂-CuO-NH₂-Au NPs分散液，制备步骤如下：

（1）CeO₂纳米棒的制备

将10~200 mg CeCl₃·7H₂O在磁力搅拌下溶解于1~50 mL无水乙醇中并加入1.3 mL0.75 mol/L的H₂SO₄，将得到的白色悬浮液转移到聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中，于10~200 °C下加热1~50 h，将产物离心分离后加入到饱和氢氧化钠醇溶液中静置1~10天，将产物洗涤干燥即得到CeO₂纳米棒；

（2）CeO₂-CuO纳米棒的制备

将1~10 mg Cu(CH₃COO)₂·H₂O溶解到16 mL乙醇中，然后将1~100 mg CeO₂纳米棒加入上述溶液中并在1~200 °C条件下反应12 h，将产物离心分离并在80 °C下干燥1~10 h制得CeO₂-CuO纳米棒；

（3）Au纳米颗粒杂化氨基化CeO₂-CuO纳米棒CeO₂-CuO-NH₂-Au NPs的制备

将制得的CeO₂-CuO纳米棒加入到50 mL无水乙醇中，并加入1 mL三氨丙基三乙氧基硅烷70 °C下加热2 h，通过离心分离得到氨基化CeO₂-CuO，将氨基化CeO₂-CuO加入Au NPs洗涤干燥即得Au纳米颗粒杂化氨基化CeO₂-CuO纳米棒CeO₂-CuO-NH₂-Au NPs。

3.如权利要求1所述的一种基于Au@Ag异质结纳米棒的玉米赤霉烯酮免疫传感器的构建方法，其特征在于，所述的Au@Ag异质结纳米棒负载硫堇的二抗标记物Au@Ag@Ab₂@Th，制备步骤如下：

（1）Au@Ag异质结纳米棒的制备

将1~200 mg硝酸银、0.6 mL 20 mg/mL氯金酸及0.5640 g PDDA同时加入到140 mL乙二醇溶液中，在195 °C条件下反应80 h，将产物离心分离并用超纯水洗涤即得Au@Ag异质结纳米棒；

（2）Au@Ag异质结纳米棒负载硫堇的二抗标记物Au@Ag@Ab₂@Th的制备

将0.5 mL 1.0 mg/mL Au@Ag 异质结纳米棒样品溶于1.0 mL超纯水中，并加入0.1 mL的玉米赤霉烯酮抗体anti-ZEN和硫堇，4 °C下振荡1~5 h，得到的产物14500 rpm离心分离，固体重新分散在蒸馏水中即为Au@Ag异质结纳米棒负载硫堇的二抗标记物Au@Ag@Ab₂@Th。

4.如权利要求1所述的一种基于Au@Ag异质结纳米棒的玉米赤霉烯酮免疫传感器用于玉米赤霉烯酮的检测方法，其特征在于，检测步骤如下：

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL的含有浓度为4~6 mmol/L铁氰化钾和10^-2~10 mmol/L硝酸钾溶液中进行测试；

（2）用方波伏安法对玉米赤霉烯酮标准溶液进行检测，其电压测试范围为0V ~ 0.6V；

（3）当背景电流趋于稳定后，通过记录玉米赤霉烯酮加入前后的传感器的峰电流值的变化，绘制工作曲线。