[发明专利]一种构建肝脏人源化小鼠模型的方法

说明书

本发明属于生物医学领域，涉及一种人源化肝脏嵌合小鼠模型的构建方法，其中包括，构建具有可诱导型肝损与免疫缺陷表型的ADSB小鼠，并通过白喉毒素干预使所述实验小鼠形成肝损后，进行人肝细胞嵌合建得人肝嵌合小鼠模型；本发明方法构建了具有可诱导型肝损与免疫缺陷表型的ADSB小鼠，构建获得的人源化肝脏小鼠模型可为肝移植研究提供可行的动物模型支撑，可深入探讨肝细胞移植和肝脏再生等机制，并可用于人类病毒性肝炎如HBV、HCV等感染相关的基础研究，对相关治疗药物研发与评估具有重要的理论和应用价值。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及实验动物模型的建立方法，具体涉及一种构建人肝嵌合小鼠模型的方法，尤其涉及一种可诱导的特异性肝脏损伤后进行人肝嵌合模型的构建方法。

背景技术

资料公开了肝脏疾病已成为对人类威胁最大的疾病之一，除病毒性肝炎外，肝脏疾病中肝硬化、肝癌等的危害均相当严重；据统计，目前，中国每年用于肝炎和肝病的直接医疗费用高达1000多亿元人民币。临床对于肝脏疾病的干预措施中，肝脏移植手术对于解决肝脏系统疾病和肝脏代谢紊乱等渐成为一种非常重要的干预手段之一。

业内共识，人源化肝、免疫系统的双嵌合小鼠模型可用于研究相关病毒复制和免疫反应情况，其可为HBV、HCV感染等重大传染性肝病的研究，以及可为脂肪肝、肝硬化、肝癌等肝脏疾病的研究提供人源化研究平台。

有关研究表明，对于乙型肝炎病毒而言，由于其特殊的嗜人肝性，不易在其他动物模型重现其感染过程，因此，目前缺乏有效的小动物模型，建立能有效模拟人体HBV感染及免疫应答的实验动物模型正成为当前深入推进HBV研究的重大而紧迫的需求。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种构建肝脏人源化小鼠模型的方法，尤其是可诱导的特异性肝脏损伤后进行人肝嵌合模型的构建方法，从而获得人肝嵌合小鼠模型。为重大传染性肝病以及为肝癌等肝脏疾病提供人源化研究平台。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷，提供一种构建肝脏人源化小鼠模型的方法，尤其是可诱导的特异性肝脏损伤后进行人肝嵌合模型的构建方法，从而获得人肝嵌合小鼠模型；该模型可用于HBV、HCV感染等重大传染性肝病的研究以及为脂肪肝、肝硬化、肝癌等肝脏疾病的研究提供人源化研究平台。

本发明提供了一种人源化肝脏嵌合小鼠模型的构建方法，其中包括，构建具有可诱导型肝损与免疫缺陷表型的ADSB小鼠，并通过白喉毒素干预使所述实验小鼠形成肝损后，进行人肝细胞嵌合建得人肝嵌合小鼠模型；本发明方法构建获得的人源化肝脏小鼠模型可为肝移植研究提供可行的动物模型支撑，可深入探讨肝细胞移植和肝脏再生等机制，并可用于人类病毒性肝炎如HBV、HCV等感染相关的基础研究，对相关治疗药物研发与评估具有重要的理论和应用价值。

本发明基于业内知悉的有关特殊品系动物的出现以及依托它们构建的人类重大疾病动物模型，是感染性疾病转化医学研究的必需工具的基础，在获得的可诱导的特异性肝脏损伤小鼠模型(专利申请号201510153724.4)基础上进一步优化为Alb-cre/DTR/SCID-beige(Alb-cre：肝脏特异性表达Cre酶；DTR：条件性转入人白喉毒素受体基因，其表达受Cre/LoxP系统控制；SCID-beige：免疫缺陷小鼠)小鼠模型，简称为ADSB小鼠；本发明方法中采用白喉毒素干预ADSB小鼠致使该ADSB小鼠发生肝脏损伤，继而对所述的肝脏损伤的ADSB小鼠进行人肝细胞移植，一月后观察检测到人肝细胞已成功在小鼠体内定植，构建获得的人源化肝脏小鼠模型。

具体而言，本发明的一种人源化肝嵌合小鼠模型的构建方法，其特征在于，基于ADSB三转基因小鼠，在特异性肝脏损伤的基础上进行人肝细胞移植，其包括步骤：

1.ADSB三转基因小鼠的获得、繁育和鉴定

将Alb-cre与DTR小鼠杂交后获得Alb-cre/DTR双转基因小鼠，再将其与SCID-beige小鼠杂交，获得ADSB三转基因小鼠；