[发明专利]一种针对羊种3型布鲁氏菌感染的DNA疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种分离的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

2.一种针对羊种3型布鲁氏菌感染的DNA疫苗，其特征在于，所述DNA疫苗为包含权利要求1所述DNA片段的真核表达载体。

3.如权利要求2所述的DNA疫苗，其特征在于，所述真核表达载体选自pVAX1、pCI、pcDNA3.1和pJW4303。

4.一种疫苗制剂，其特征在于，所述制剂包括权利要求2或3所述DNA疫苗和佐剂。

5.如权利要求4所述的疫苗制剂，其特征在于，所述佐剂选自细胞因子基因佐剂和/或载体功能免疫佐剂中的一种或几种。

6.如权利要求5所述的疫苗制剂，其特征在于，所述细胞因子基因佐剂选自IL-2、IL-12、IFN-γ、GM-CSF中的一种或几种，所述载体功能免疫佐剂选自脂质体、免疫刺激复合物(Immune stimulating complexes,ISCOMs)和减毒的侵袭性胞内细菌中的一种或几种。

7.如权利要求4所述的疫苗制剂，其特征在于，所述DNA疫苗和所述佐剂的质量比为1：1-5。

8.一种制备权利要求2或3所述DNA疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括：构建包含权利要求1所述DNA片段的真核表达载体。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：(1)通过PCR方法扩增得到权利要求1所述DNA片段；(2)用EcoRⅠ和BamHⅡ分别酶切PCR扩增所得DNA片段和pVAX1载体；(3)连接酶切后的DNA片段和pVAX1载体，转化感受态细胞；(4)挑取阳性克隆，通过双酶切和测序方式对阳性克隆进行确认；(5)提取阳性克隆的质粒。

10.一种制备权利要求4-7任一项所述疫苗制剂的方法，其特征在于，将所述DNA疫苗与所述佐剂混合。