[发明专利]一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒及其检测方法，本发明的试剂盒采用磁性微粒包被的抗原、发光标记物标记的蛋白与待测样本中的抗体发生特异性反应而进行待测样品中抗体含量的测定。本发明的试剂盒实现猪圆环病毒2型抗体的定量检测，灵敏度高，检测范围宽，快速，重复性好，全自动操作及高通量检测的效果。

技术领域

本发明涉及猪圆环病毒2型抗体检测技术领域，尤其涉及一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒及采用该试剂盒进行检测的检测方法。

背景技术

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是目前发现的最小的动物病毒，病毒粒子直径约17nm，为共价闭合，环状，单股DNA病毒，PCV具有两种基因型：PCV1和PCV2。PCV1无致病性，但广泛存在于猪体内和猪源传代细胞系，PCV2对猪有致病性，主要引发断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)。除了引发PMWS外，PCV2还与仔猪先天性震颤、猪皮炎肾炎综合征、猪呼吸道综合征(PDNS)、母猪繁殖障碍等疾病相关。自1991年在加拿大首次报道以来，许多国家和地区都报道了该病的发生。近年来，该病的发生呈上升趋势，给世界的养猪业造成了相当大的经济损失。

在我国，免疫接种是防治猪圆环的主要策略。猪圆环病毒Cap蛋白起着重要的作用，也是必须的结构蛋白，免疫后能产生保护性中和抗体。免疫后猪圆环病毒抗体效价与攻毒保护具有明显的相关性，所以通过抗体水平的监测来制定合理、有效的免疫程序是提高群体免疫水平的保证。

猪圆环病毒2型Cap蛋白是猪圆环主要的中和性抗原蛋白，其抗体是疫苗免疫后抗体水平的监测和病毒感染后抗体水平检测的主要标的，抗体水平高低与其免疫或感染状况直接相关，所以有猪圆环病毒2型抗体定量检测的现实需求。现有的检测机构有兽医站、疫苗公司、养殖场等存在着大量的样本，也对大通量的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒和仪器有着需求。现有的ELISA、胶体金等的方法难以满足。

目前建立并应用的猪圆环病毒2型抗体检测方法有ELISA方法、病毒中和试验、免疫荧光法、胶体金试纸条等方法，其中ELISA方法目前是猪圆环病毒2型抗体最常用的方法，ELISA所测OD值的范围在0.1-3.5，限定了所测量的抗体范围较窄，只能做到半定量，反应的时间通常在2小时左右，时间较长；病毒中和试验是通过猪圆环病毒2型和抗体在细胞上中进行抗原抗体反应来判定抗体滴度，能较全面反映中和抗体的高低，全过程为病毒滴定、抗体中和、结果判定等过程需5-7天时间，全过程只能人工来操作、判定，重复性差；免疫荧光法通常也是在细胞上操作，存在灵敏度不高，重复性差等缺点；胶体金方法能快速得出结果，但是只能定性，难以定量，限制了应用范围。

专利CN104237513A(公布日为2014.12.24)公开了一种甲状腺过氧化物酶抗体磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括TPO-Ab校准品，TPO-Ab稀释液，偶联有链霉亲和素的磁性微粒悬浮液，生物素标记的TPO-Ab抗原，鼠抗人酶标结合物，TPO-Ab质控品，化学发光液A和B，20倍浓缩洗液和反应管，该试剂盒对甲状腺过氧化物酶抗体的含量进行定量测定，实现灵敏度高，特异性，精密性，稳定性良好的效果。该试剂盒在人抗体上应用广泛，但在动物抗体上还未有报道。

目前猪圆环Cap抗体检测主要采用的是半定量的ELISA方法并不能满足定量需求，这一点主要是由于缺乏猪圆环Cap抗体标准品和定量标准、没有准确可重复性的检测方法造成的。与兽医不同，在人医领域，各个疾病的标志物，例如上述的甲状腺过氧化物酶抗体，都已经得到充分研究，建立了通用的国家标准、国际标准或行业标准，定量简单易行，因此不同厂家生产的产品得到了规范，检测结果一致性较好。而在兽医领域，目前的猪圆环Cap抗体检测市场大部分被进口的ELISA定性检测试剂占据，并且各厂家的产品检测结果相差很大，不利于畜牧养殖业发展，亟需建立定量标准以及准确可靠重复性佳的检测方法。

发明内容