[发明专利]一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，其特征在于，包括猪圆环病毒2型Cap蛋白偶联或间接偶联磁性微粒的溶液，发光标记物标记的蛋白溶液和发光底物；

所述猪圆环病毒2型Cap蛋白选自猪圆环病毒Cap蛋白全长、猪圆环病毒Cap蛋白片段、猪圆环病毒Cap蛋白多肽中的一种，所述的磁性微粒为以Fe₃O₄为核心，表面覆有聚合物涂层，并导入羧基或甲基磺酰基活性基团的微粒；

所述磁性微粒的直径为1-3μm，所述磁性微粒直径CV3%;

所述猪圆环病毒2型Cap蛋白与所述磁性微粒的最适用量为1.0-5nmol/10mg 磁性微粒；

所述试剂盒中还包括稀释液，质控品，校准品和清洗液，稀释液选自缓冲液、牛血清白蛋白、阻断剂、单克隆抗体，多克隆抗体中的一种或多种的组合；

所述质控品为猪圆环病毒2型抗体低值质控品和高值质控品，所述低值质控品的质控范围为22-36U/mL，高值质控品的质控范围为92-142U/mL；所述清洗液为0.05mol/L pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液或0 .01mol/L pH为7 .0的磷酸盐缓冲液，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和磷酸盐缓冲液中分别含有0.1％的Tween-20。

2.如权利要求1所述的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，其特征在于，所述猪圆环病毒2型Cap蛋白偶联磁性微粒的溶液制备方法包括如下步骤：

S1，取含磁性微粒的溶液，采用缓冲液清洗磁性微粒，并悬浮于缓冲液中；

S2，加入纯化的猪圆环病毒2型Cap蛋白；

S3，加入交联剂或催化剂，振荡反应；

S4，磁铁吸附磁性微粒，洗涤，悬浮在含有封闭剂的溶液中。

3.如权利要求1所述的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，其特征在于，所述猪圆环病毒2型Cap蛋白间接偶联磁性微粒的溶液的制备方法包括如下步骤：

1)磁性微粒结合亲和素

S1，取含磁性微粒的溶液，采用缓冲液清洗磁性微粒，并悬浮于缓冲液中；

S2，加入亲和素；

S3，加入交联剂或催化剂，振荡反应；

S4，磁铁吸附磁性微粒，洗涤，悬浮在含有封闭剂的溶液中，构成磁性微粒-亲和素复合物；

2)猪圆环病毒2型Cap蛋白结合生物素

S1，取猪圆环病毒2型Cap蛋白，透析；

S2，加入生物素，反应；

S3，加入封闭剂，反应；

S4，透析除去未结合的生物素，获得猪圆环病毒2型Cap蛋白-生物素；

3)磁性微粒-亲和素与猪圆环病毒2型Cap蛋白-生物素复合物混合，通过亲和素与生物素的结合力连接磁性微粒与猪圆环病毒2型Cap蛋白。

4.如权利要求1所述的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光标记物标记的蛋白溶液的制备方法包括如下步骤：

S1，取与猪圆环病毒2型Cap蛋白或猪圆环病毒2型抗体特异性结合的蛋白，透析；

S2，加入发光标记物，反应；

S3，加入封闭剂，反应；

S4，透析分离未结合的发光标记物。

5.如权利要求1所述的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光标记物选自吖啶酯、碱性磷酸酶、过氧化物酶中的任意一种，所述发光标记物标记的蛋白选自猪圆环病毒2型Cap抗原、单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体、抗猪IgG抗体、抗猪IgM抗体中的任意一种。

6.如权利要求1所述的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光底物与发光标记物一一对应。