[发明专利]一种葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供了一种葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括用于特异性识别葡萄糖脑苷脂酶基因上4个多态性位点的Taqman探针及用于扩增多态性位点所在基因片段所对应的引物对，4个多态性位点分别为N188S、F213I、D409H和L444P，所述Taqman探针包括野生型探针和突变型探针，所述引物对包括上游引物和下游引物。应用本发明的检测试剂盒可以快速高效检测葡萄糖脑苷脂酶基因4个多态性位点的基因型，是一种快速、简便、经济、高效的葡萄糖脑苷脂酶缺乏症基因检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒，及其检测方法。

背景技术

编码葡糖脑苷脂酶的基因(Glucocerebmsidas，以下简述GBA)突变会造成该酶的缺乏，从而引起葡糖脑苷脂在肝、脾、骨骼和中枢神经系统的单核-巨噬细胞内蓄积而发病，产生肝脾肿大、骨骼畸形、生长发育落后、贫血等临床表现。

然而目前检测GBA的主要技术为基因测序，存在低通量、操作复杂、耗时长等缺点。

荧光定量PCR技术是一项发展较为成熟的核酸检测方法。其优势在于：操作简便，因闭管操作可以减少污染，结果分析快捷。其中Taqman探针技术是一种通过检测聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，以下简称PCR)过程中产生的荧光信号来区分等位基因类型的基因检测技术。针对待检测的基因位点，设计一对Taqman探针及其对应上下游引物，所述探针对分别检测目标位点的两种等位基因。每条探针的5'端标记荧光报告基团，3’端标记淬灭基团。在PCR扩增过程中，利用Taq酶5’端核酸酶活性降解因与目标序列完全互补而结合在单链上的探针，令荧光基团与淬灭基团分离从而产生荧光。若探针与目标序列存在错配，则不能与单链结合，亦不会产生荧光。因此通过荧光定量PCR仪收集PCR扩增期间荧光信号的变化，可以判别检测样本的基因型。Taqman探针技术最突出的优点是不需要分离或洗脱等PCR后处理过程，简化操作流程并提高了检测速度。

发明内容

本发明旨在提供一种高准确性、低成本、高通量、快速的检测试剂盒，可用于检测葡糖脑苷脂酶基因是否存在突变。

本发明所采取的技术方案是：

一种葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒，包括用于特异性识别葡萄糖脑苷脂酶基因上4个多态性位点的Taqman探针及用于扩增多态性位点所在基因片段所对应的引物对，4个多态性位点分别为N188S、F213I、D409H和L444P。

所述Taqman探针包括野生型探针和突变型探针，对应4个多态性位点的野生型探针和突变型探针如下表所示：

表1、各个多态性位点的探针序列

W代表野生型特异探针，M代表突变型特异探针。

Taqman探针的5'端标记有荧光报告基团、3'端标记有淬灭基团，所述荧光报告基团是FAM、VIC、TAMRA或ROX中的一种，所述淬灭基团是BHQ-1或BHQ-2。

所述引物对包括上游引物和下游引物，对应4个多态性位点的上游引物和下游引物如下表所示：

表2、各个多态性位点的引物序列

F代表上游引物，R代表下游引物。

优选地，所述引物对以2个多态性位点为一组进行复合扩增。所述多态性位点的分组为：第一组，N188S、F213I；第二组，D409H、L444P。