[发明专利]封闭CD47并激发抗肿瘤免疫的重组溶瘤腺病毒及其用途

说明书

本发明涉及封闭CD47并激发抗肿瘤免疫的重组溶瘤腺病毒及其用途。具体而言，本发明提供一种重组溶瘤腺病毒载体，其可操作地插入或者包含下述外源基因：SIRPα‑Fc基因，即SIRPαCV1结合区与人IgG1 Fc段基因的融合基因或其简并序列；或SIRPα‑Fc基因通过连接序列与其他外源基因连接形成的多核苷酸序列或其简并序列。本发明的重组溶瘤腺病毒可在肿瘤细胞内高效表达外源基因SIRPα‑Fc，SIRPα‑Fc能与肿瘤细胞表面CD47特异性结合，阻断CD47‑SIRPα的负调节作用，增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，并能同时引发ADCC效应和CDC效应，激发机体抗肿瘤免疫，增强抗肿瘤效能。

技术领域

本发明属于基因工程学和肿瘤学，涉及封闭CD47并激发抗肿瘤免疫的重组溶瘤腺病毒及其用途。

背景技术

恶性肿瘤已成为严重威胁人类生命健康的一大类疾病，传统的抗肿瘤治疗手段包括手术治疗、化疗和放疗等，虽取得一些疗效，但因各自治疗的局限性始终无法达到预期的效果，研究表明癌症发病率及死亡率均呈明显上升趋势。近几年，随着对肿瘤发生发展机理研究的不断深入，包括基因治疗在内的生物治疗已经成为肿瘤临床中不可或缺的一部分。腺病毒因其致病性弱、基因携带能力强、与宿主细胞基因组整合风险低及基因组较易修饰并可大规模生产等优点，是基因治疗中最常用的病毒载体。据J Gene Med统计，截至2016年2月，全球共有2356项基因治疗进入临床试验，其中使用腺病毒作为载体的数量最多，达499项，占总数的21.2％。

经过基因改造的溶瘤腺病毒能相对特异地在肿瘤细胞内复制增殖，裂解肿瘤细胞，而释放的子代病毒又可以感染周围肿瘤细胞，通过级联放大作用，高效杀伤肿瘤细胞，清除肿瘤病灶。在我国，溶瘤腺病毒药物H101联合化疗在多种类型恶性肿瘤的临床治疗或临床实验中显示了部分疗效(Current Cancer Drug Targets，2007，7(2):141-8)。近年来，溶瘤腺病毒在增强免疫方面的功能逐渐被认知与重视(Viruses，2015，7(11):5780-91；NatRev Drug Discov.，2015，14(9):642-62)。溶瘤腺病毒在裂解肿瘤细胞时，可促使肿瘤细胞免疫性死亡，包括免疫性细胞凋亡、坏死、自噬性细胞死亡等，上调钙网蛋白、热休克蛋白在细胞膜上的含量，释放ATP、高迁移率族蛋白B1(High-Mobility Group Box1，HMGB1)、尿酸等损伤相关因子、病原相关分子、危险信号分子以及肿瘤相关抗原，从而进一步激活树突状细胞(DC)功能，提升抗肿瘤免疫反应(Front Oncol.，2014Apr 10，4:74.)。研究证实，腺病毒可作为TLR9 (Toll-Like Receptor)的激动剂，促进DC细胞成熟，并增强I型IFN的免疫反应(J Virol.，2012，86(11):6279-85)。另外，腺病毒还被证明可诱导肿瘤细胞下调免疫相关信号通路，并通过增强IFNγ反应，诱导肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-AssociatedMacrophages，TAM)向M1型巨噬细胞转变，从而重塑肿瘤微环境，发挥治疗作用(Oncotarget，2016，7(2):1500-15)。