[发明专利]封闭CD47并激发抗肿瘤免疫的重组溶瘤腺病毒及其用途

权利要求书

1.一种重组溶瘤腺病毒载体，其可操作地插入或者包含下述外源基因：

SIRPα-Fc基因，即SIRPαCV1结合区与人IgG1Fc段基因的融合基因，或其简并序列；或

SIRPα-Fc基因通过连接序列与其他外源基因连接形成的多核苷酸序列或其简并序列。

2.根据权利要求1所述的重组溶瘤腺病毒载体，其中，所述重组溶瘤腺病毒载体可操作地插入或者包含依次连接的下述外源基因：

组成型强启动子、融合基因SIRPα-Fc或其简并序列、SV40PolyA和第一绝缘子序列。

3.根据权利要求2所述的重组溶瘤腺病毒载体，其特征在于，所述重组溶瘤腺病毒载体具有如下的(1)－(14)中的任一项或者多项：

(1)所述SIRPαCV1结合区的序列如SEQ ID NO：4所示；

(2)所述人IgG1Fc段基因的序列如SEQ ID NO：5所示；

(3)所述SIRPαCV1结合区序列和人IgG1Fc段基因经由编码接头序列的多核苷酸序列连接；优选地，所述接头序列含有一个或多个甘氨酸，优选为GGC；更优选地，所述SIRPα-Fc基因的序列如SEQ ID NO：6所示；

(4)所述组成型强启动子为CCAU、CMV、CAG、SV40、EF-1α、Ubc或PGK启动子；优选为CCAU或CMV启动子；优选地，所述CCAU启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；优选地，所述CMV启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

(7)所述第一绝缘子序列如SEQ ID NO：1所示；

(8)所述外源基因可操作地连接或插入在腺病毒E1B区；

(9)所述腺病毒E1B区的19KDa与55KDa蛋白编码序列缺失；

(10)所述腺病毒E1A的启动子为人端粒酶逆转录酶启动子、癌胚抗原启动子、甲胎蛋白启动子、前列腺素特异性抗原的启动子或缺氧诱导因子-1调控的缺氧反应元件启动子；优选为人端粒酶逆转录酶启动子；更优选地，所述人端粒酶逆转录酶启动子的序列如SEQ IDNO：7所示；

(11)所述腺病毒E1A表达框与外源基因所在表达框的方向相反；

(12)所述人端粒酶启动子前包含第二绝缘子序列，所述第二绝缘子序列与第一绝缘子序列相同或者不同；具体地，所述第二绝缘子序列如SEQ ID NO：8所示；

(13)所述腺病毒为C亚属；

(14)所述腺病毒为利用35型腺病毒的纤毛蛋白替换5型腺病毒纤毛蛋白构建成的嵌合型腺病毒载体。

4.一种包含外源基因的重组腺溶瘤病毒，其中，所述外源基因为SIRPαCV1结合区的基因与人类IgG1的Fc段基因的融合基因，即SIRPα-Fc基因；

优选地，所述SIRPαCV1结合区的基因和人IgG1的Fc段基因在同一个表达框内；

更优选地，所述SIRPαCV1结合区的基因和人IgG1的Fc段基因能够以融合蛋白形式高效表达。

5.一种重组腺溶瘤病毒，其含有权利要求1至3中任一项所述的重组溶瘤腺病毒载体；

优选地，所述重组腺溶瘤病毒由权利要求1至3中任一项所述的重组溶瘤腺病毒载体在HEK293细胞中重组得到。

6.保藏编号为CCTCC NO:V201637的重组溶瘤腺病毒。

7.权利要求1至3中任一项所述的重组溶瘤腺病毒载体或者权利要求4至6中任一项所述的重组溶瘤腺病毒在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗癌症或者抗肿瘤的药物中的用途。

8.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述癌症或者肿瘤为肺癌、肝细胞癌、淋巴瘤、结肠癌、大肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、胆管癌、胆囊癌、食管癌、肾癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌或头颈癌。

9.权利要求1至3中任一项所述的重组溶瘤腺病毒载体或者权利要求4至6中任一项所述的重组溶瘤腺病毒在制备杀伤肿瘤细胞特别是肿瘤干细胞的药物中的用途。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述肿瘤细胞为选自下列肿瘤的细胞：

肺癌、肝细胞癌、淋巴瘤、结肠癌、大肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、胆管癌、胆囊癌、食管癌、肾癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌或头颈癌。