[发明专利]植入前筛选

说明书

本发明涉及评估胚胎的生存力的方法，其中所述方法包括以下步骤：测量培养基样品中选自TMPRSS2或PRSS8的蛋白质标志物的水平和/或活性，其中所述样品从通过体外受精产生的胚胎的体外培养基获得，其中所述蛋白质标志物的水平和/或活性指示所述胚胎的生存力。

技术领域

本发明涉及在体外受精(in vitro fertilization，IVF)后评估胚胎的生存力的方法。评估胚胎的目的是评估其向雌性接受者进行胚胎移植的适合性。本发明还涉及基于对通过用来自同一雌性供体的卵母细胞进行IVF产生的胚胎进行的比较来选择适于植入之胚胎的方法。本发明的方法基于在胚胎条件化培养基样品中测量选自TMPRSS2或PRSS8的蛋白质标志物的水平和/或活性。已发现，这两种标志物在胚胎条件化培养基中的水平与胚胎在植入后的生存力良好相关，使得这些标志物特别适合用于本发明的筛选方法。

背景技术

体外受精(IVF)的成功率有限，其中低于40％的IVF治疗实现活产(www.nhs.uk/conditions/IVF)。成功率低的一个主要成因是难以选择用于子宫植入的优质胚胎，特别是在“单胚胎移植”的情况下，其中只有一个胚胎被转移到母体以避免多产的问题。人胚胎在形态和染色体上是多样化的，其中至少有三分之二的人植入前胚胎含有染色体错误或非整倍体细胞，这可能阻碍正常的胚胎发育。这种性质的缺陷型胚胎不适合完全植入，或者在一些情况下会导致在植入之后不能生存或“发育受损”的胚胎流产。开发评估人胚胎生存力的可靠方法仍然是在IVF临床机构提高妊娠率的显著挑战。

存在用于在植入之前筛选通过IVF产生的胚胎以评估胚胎质量的技术。这些技术在其准确性、易用性和侵入性方面不同。目前的技术包括形态学筛选、延时成像和植入前遗传筛查(pre-implantation genetic screening，PGS)。然而，这些现有技术伴随有缺点(参见Bolton等2015Human Fertility 18：3，156-164的综述)。

形态学筛选涉及在特定发育阶段或在延时成像的情况下在整个发育期间对胚胎进行显微分析。然后，由胚胎学家根据某些形态学标准对胚胎进行分级，例如发育阶段、细胞大小、细胞形状、粒度、凋亡和扩增。有多种分级方案和方法，并且因此分类在一定程度上是可变的并且在中心之间具有主观性。此外，形态学检查并不总是检测在不能生存胚胎中发生的那些染色体异常的可靠手段。因此，通过该方法被认为是“最高质量”的胚胎的移植仅在36.5％的情况下导致妊娠(De Neubourg等2004 Human Reproduction 19：6，1476-1479)。

PGS(植入前遗传筛查)是对通过抽吸从胚胎移出的一个或两个细胞的染色体状态进行的遗传分析。通常，这涉及对从胚泡移出的滋养外胚层细胞上应用阵列比较基因组杂交(array comparative genomic hybridisation，aCGH)或下一代测序(next-generaionsequencing，NGS)。虽然这种技术允许对潜在的遗传异常进行更详细的分析，但是PGS要求从发育中胚胎对细胞进行活检，并且因此是一种并非无风险的侵入性技术。将胚胎从其外壳机械地移出，使得可以抽吸细胞，这可能在活检时导致对胚胎的物理损伤。这一操作的全部后果，特别是长期影响，尚未得到充分了解。

PGS由于称为镶嵌性(mosaicism)的现象而进一步复杂化，其中活险的单细胞不能代表胚胎的染色体状态。例如，内细胞团与外部滋养外胚层的细胞之间的倍性状态不一致是相对常见的(Brezina&Kutteh，2015BMJ 350，7611)，这可导致误诊。PGS的另一个限制是该操作需要至少两个高质量的胚泡用于分析，并且因此不适用于许多患者。