[发明专利]高纯度胶原蛋白颗粒及其制备方法与用途

说明书

本发明涉及一种制备胶原蛋白颗粒的方法。每一胶原蛋白颗粒的颗粒尺寸为约10‑250微米，且颗粒中所含的胶原纤维结构相对完整。

本申请主张2015年8月11日申请的美国临时案第62/203,904号的所有权利，其内容整体并入本申请案中。

技术领域

本发明内容是关于一种制备胶原蛋白的方法，特别是制备胶原蛋白颗粒的改良方法，所述胶原蛋白适合作为可供细胞生长的生物性支架，例如，作为整形手术过程(即，整容手术)或软组织填充(例如，平滑脸部线条以及皱纹)所需的注射用皮肤填充剂；或者是作为伤口敷料用以促进伤口愈合。

背景技术

胶原蛋白是一种不溶性纤维蛋白，其存在于脊椎动物中，为结缔组织(如，皮肤)的纤丝的主要成分。传统制备胶原蛋白的方法不仅耗时且效率低，更会破坏胶原蛋白结构的完整性，使其不适合当作生物性支架，因而无法用于整容手术或作为伤口愈合移植物来使用。此外，市面上的胶原蛋白(如，Zyderm和Zyplast)是取自于乳牛皮肤，其无法用于所有的患者，因已知牛胶原蛋白中会在相当多宿主中引发严重的过敏反应，特别是具有自体免疫病史的个体身上。此外，牛胶原蛋白不会长时间存在于注射位置，因此，需定期补充注射。胶原蛋白之所以仅短暂存在于注射部位的原因是，从牛皮萃取胶原蛋白的过程中，胶原蛋白结构受到破坏，导致该些胶原蛋白易被宿主吸收。

本领域目前亦专注于开发源自人类的胶原蛋白(例如，Cosmoderm和Cosmoplast)，但其来源有限(例如，取自包皮环切手术后的皮肤)，导致人类胶原蛋白价格居高不下。或是，患者亦可通过抽脂手术从身上取得脂肪组织，经处理后形成注射形式的胶原蛋白，再立即回注使用，或是储存起来以备将来使用。然而，此一方式取得的胶原蛋白和前述牛胶原蛋白具有相同的缺陷，亦即，胶原蛋白的完整性会在分离的过程中受到破坏。

因此，本领域需要一种制备胶原蛋白的改良方法，其在分离胶原蛋白的过程中可保留胶原蛋白的天然结构和构型，使得据此制备而成的胶原蛋白可作为三维支架，供宿主细胞生长，且不会诱发宿主细胞出现严重的免疫反应。

发明内容

为解决上述制备胶原蛋白颗粒的问题，本案发明人公开了一种从动物皮肤(例如，牛或猪的皮肤)中制备胶原蛋白颗粒的方法，且该胶原蛋白颗粒能够保留天然胶原蛋白的构型。

再者，本发明内容的第一方面是提供一种制备胶原蛋白颗粒的方法。所述方法包含以下步骤：

(1)对一厚度为0.1-1毫米的动物皮肤施以一去细胞处理；

(2)以一水溶液处理步骤(1)中该经去细胞处理的动物皮肤，其中该水溶液包含一非离子表面活性剂；

(3)以一蛋白酶处理步骤(2)中该经水溶液处理的动物皮肤；

(4)以一核酸酶处理步骤(3)中该经蛋白酶处理的动物皮肤；

(5)对步骤(4)中该经核酸酶处理的动物皮肤施以一去离子化处理；

(6)对步骤(5)中该经去离子化处理的动物皮肤施以一去化学物质处理，以产生一胶原蛋白基质；以及

(7)将步骤(6)中该胶原蛋白基质进行造粒，以产生该胶原蛋白颗粒，其粒径为10-250微米。

依据某些实施方式，在步骤(1)中，将厚度为约0.1-1毫米的动物皮肤，以超临界流体(SCF)在压力100–500巴(par)以及温度30-50℃下，处理约20分钟至5天。

所述SCF是超临界二氧化碳(scCO₂)、超临界一氧化二氮(scN₂O)、超临界水(scH₂O)、超临界烷类、超临界烯类、超临界醇类或超临界丙酮。在一实施例中，所述SCF是scCO₂。在其他实施例中，所述SCF是scN₂O。