[发明专利]多糖珠粒的制备方法

说明书

本发明的技术领域

本发明涉及多糖珠粒，且更特别地涉及通过反相悬浮技术制备多糖珠粒。本发明也涉及交联的多糖珠粒和涉及珠粒用于分离目的的用途。

发明背景

交联的多糖珠粒通常用作蛋白和其它生物分子的色谱分离的静止相。这样的珠粒在二十世纪六十年代早期引入(见例如US3208994，其通过引用以其整体结合到本文中)，主要用于实验室分离目的。由于此后它们的应用有极大的提高，并且交联的多糖珠粒现在常规用于分离许多生物药物例如单克隆抗体、血浆成分、胰岛素和各种重组蛋白的大规模制备方法。

制备多糖珠粒的最常见的方法是通过反相悬浮方法，其中多糖的水溶液被乳化为在连续的油相中的油包水(w/o)乳液，并且乳液液滴通过交联或者通过热凝胶化凝固。这样的方法描述于例如US3208994、US4794177和US6602990中(通过引用以其整体结合到本文中)，其使用卤代烃或芳族烃作为油相。本文的问题是当前卤代烃和芳族烃的大规模使用因环境原因而被淘汰。

因此对制备多糖珠粒而不使用卤化或芳族溶剂的方法存在着需求。

发明概述

本发明的一个方面是提供制备多糖珠粒的环境可接受的方法。这用如在权利要求中定义的方法实现。

一个优点是所述方法不使用卤化或芳族溶剂。进一步的优点是可获得具有良好的孔隙结构和机械特性的球形珠粒。

本发明的第二个方面是提供适合于分离目的的多糖珠粒。这用如在权利要求书中定义的珠粒实现。

本发明的第三个方面是提供用于分离交联珠粒的目的的用途。这采用如在权利要求中定义的用途实现。

本发明的进一步的合适实施方案描述于从属权利要求中。

附图

图1显示本发明的方法的概要。a) 将水相加入到油相中，b) 油包水乳液，c) 分散于油相中的凝固珠粒。

图2显示依据本发明的实施方案的右旋糖苷与表氯醇的交联。

图3显示来自a) 样品9090 (2-MCH)和b) 样品5595 (3-MCH)的溶胀颗粒的显微镜照片。

图4显示来自样品5624 (环己烷 + 3-MCH)的溶胀颗粒的显微镜照片。

图5显示来自a) 样品6462 (CPME)和b) 样品5182 (CPME + 3-MCH)的溶胀颗粒的显微镜照片。

图6显示来自a) 样品6671 (DIBK)和b) 样品5382 (DIBK + 3-MCH)的溶胀颗粒的显微镜照片。

图7显示来自样品9355 (MAK)的溶胀颗粒的显微镜照片。

实施方案的详述

在一个方面，由图1-2所说明的，本发明公开一种制备多糖珠粒的方法，其包括以下步骤：

i) 提供包含多糖水溶液的水相1。这可通过使多糖溶于水或溶于包含一种或多种另外的成分例如盐、缓冲剂、碱、还原剂等的水中而完成。多糖可例如是天然多糖例如右旋糖苷、支链淀粉、淀粉、藻酸盐、瓜尔胶、刺槐豆胶、魔芋、琼脂、琼脂糖、角叉菜胶等。作为实例，多糖可以是右旋糖苷，例如具有20-4000 kDa、40-2000 kDa或100-500 kDa的重均分子量(Mw)的右旋糖苷。或者，多糖可以是天然多糖的衍生物，例如纤维素醚、琼脂糖醚、淀粉醚、DEAE右旋糖苷等。有利地，多糖在室温或在升高的温度下是水溶性的。

ii) 提供包含至少一种水-不混溶的有机溶剂和至少一种油溶性乳化剂的油相2。水-不混溶的有机溶剂可合适地具有在25℃的小于5 vol. %，例如小于3 vol. %或小于2 vol. %的水溶性，并且水在25℃的水-不混溶的有机溶剂中的溶解度可合适地小于5 vol. %，例如小于3 vol. %或小于2 vol. %。油溶性乳化剂可合适地溶于有机溶剂中，并且油相可通过使一种或多种油溶性乳化剂溶于水-不混溶的有机溶剂或水-不混溶的有机溶剂的混合物中来制备。乳化剂在油相中的浓度可例如是0.01-0.5 g/ml，例如0.05-0.3 g/ml。在使用混合的乳化剂的情况下，这些值也可指乳化剂在油相中的总浓度。如果使用聚合物乳化剂，油相的粘度可随着乳化剂的分子量和浓度而变化。