[发明专利]一种结合CD3和T细胞正共刺激分子的双功能分子及其应用

权利要求书

1.一种双功能分子，其结构中包括能够结合并激活T细胞表面CD3分子的第一功能域和能够结合并激活T细胞正共刺激分子的第二功能域，所述第一功能域为抗CD3的单链抗体，所述第二功能域为选自抗4-1BB的单链抗体、抗 ICOS的单链抗体、抗OX40的单链抗体、抗GITR的单链抗体、抗CD40L的单链抗体或抗CD27的单链抗体之任一的抗T细胞正共刺激分子的单链抗体，所述单链抗体包括重链可变区和轻链可变区；

其中所述第一功能域和所述第二功能域通过连接片段连接，所述连接片段为SEQ IDNO. 3所示的免疫球蛋白IgD的铰链区片段。

2.根据权利要求1所述的双功能分子，其特征在于，所述双功能分子能够同时结合并激活T细胞表面CD3分子和T细胞正共刺激分子，从而产生T细胞活化所需的第一信号和第二信号。

3.根据权利要求1所述的双功能分子，其特征在于，所述抗CD3的单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.37所示；所述抗CD3的单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.38所示；所述抗4-1BB的单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.40所示；所述抗4-1BB的单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示；所述抗ICOS 的单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.43所示；所述抗ICOS的单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.44所示；所述抗OX40的单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.46所示；所述抗OX40的单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.47所示；所述抗GITR的单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.49所示；所述抗GITR的单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.50所示；所述抗CD40L的单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.52所示；所述抗CD40L的单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.53所示；所述抗CD27的单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.55所示；所述抗CD27的单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.56所示。

4.根据权利要求3所述的双功能分子，其特征在于，所述抗CD3的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.36所示；所述抗4-1BB的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.39所示；所述抗ICOS的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.42所示；所述抗OX40的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.45所示；所述抗GITR的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.48所示；所述抗CD40L的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.51所示；所述抗CD27的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.54所示。

5.根据权利要求1所述的双功能分子，其特征在于，所述双功能分子的氨基酸序列如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.30或SEQ IDNO.34之任一所示。

6.一种多核苷酸，其编码如权利要求1～5任一项所述双功能分子。

7.一种表达载体，其含有如权利要求6所述的多核苷酸。

8.一种宿主细胞，其被如权利要求7所述的表达载体所转化。

9.如权利要求1～5任一项所述双功能分子的制备方法，包括：构建含有双功能分子基因序列的表达载体，然后将含双功能分子基因序列的表达载体转化至宿主细胞中诱导表达，从表达产物中分离获得所述的双功能分子。

10.如权利要求1～5任一项所述双功能分子用于制备T细胞体外扩增剂的用途。

11.一种体外扩增T细胞的方法，包括将如权利要求1～5任一项所述双功能分子作用于T细胞。