[发明专利]一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物应用技术领域，特别是涉及一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法。

背景技术

丙型病毒性肝炎，即HCV，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒感染引起的病毒性肝炎。丙型肝炎是一种全球性流行的传染病，全球丙型肝炎流行率平均为3.0%，每年新发HCV感染300万~400万例，估计已有1.7亿慢性HCV感染者。HCV最主要的传播方式包括经输血和血制品传播、经破损的皮肤和黏膜暴露、与感染者性交及高危性行为等。过去献血员中HCV感染率较高，是造成HCV流行的主要原因。随着全球多数国家积极开展对献血员的筛查，目前该人群中 HCV感染率迅速下降，与一般人群HCV感染率相近，而吸毒和高危性行为人群中HCV感染率显著高于一般人群，是目前 HCV流行的重要传染源。

HCV感染自然转阴率低，慢性化发生率明显高于乙肝，治疗效果差，且与肝硬化肝癌的发生及发展密切相关。目前国内尚无HCV抗病毒特效药物和相关疫苗。因此，控制HCV感染的形势十分严峻。目前主要靠早发现、早诊断和早治疗来防控HCV传染源、阻断传播途径。HCV抗体检查、乙肝表面抗原、人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体及梅毒（TP）抗体检查是我国法定的四个血源性筛查项目。

临床上有较多的丙型肝炎病毒抗体检测方法，主要包括酶联免疫法、化学发光免疫分析法。酶联免疫法的试剂盒灵敏度和特异性达不到理想要求，化学发光法的检测成本较高，这两种方法存在的缺点使其难以进行推广应用，无法作为筛查丙型肝炎病毒抗体的重要手段。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，该制备方法得到的检测试纸以双抗原夹心法为原理，诊断快速且结果准确，相比间接法能够提高产品的特异性和灵敏度，具有快捷、观察直观、省时等特点，能作为筛查丙型肝炎病毒抗体的重要手段。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，包括步骤为：

（1）制备重悬液：所述重悬液中包括三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白，将三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到重悬液；制备包被基液：用海藻糖溶于pH值为7-8的磷酸盐缓冲溶液并定容，得到包被基液；

（2）将胶体金和碳酸钾混合后调节pH值，再加入丙型肝炎病毒标记单抗和牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，所述沉淀用步骤（1）制备的重悬液重悬，再加入丙型肝炎病毒标记抗原，得到丙型肝炎病毒抗体检测免疫金；

（3）用所述包被基液、无水乙醇稀释丙型肝炎病毒包被抗原得到检测线包被液，用所述包被基液、无水乙醇稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线包被液；

（4）用所述丙型肝炎病毒抗体检测免疫金对金垫喷金得到免疫金垫，用所述检测线包被液、所述对照线包被液分别在硝酸纤维素膜上划线，得到反应膜。

（5）将所述反应膜在膜封闭液中浸泡后取出贴于聚氯乙烯底板上干燥，得到贴膜的聚氯乙烯底板；

（6）将样品垫、免疫金垫、贴膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装得到丙型肝炎病毒抗体检测试纸。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述三羟甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容后总体积的比例为0.24g：10g：5g：1g：100mL。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述重悬液的pH值用1M盐酸调节至8.4；所述磷酸盐缓冲溶液为0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）的具体过程为：将胶体金置于磁力搅拌器上搅拌，往搅拌的胶体金中加入碳酸钾，调节pH并搅拌10min，加入丙型肝炎病毒标记单抗并搅拌15min，再加入牛血清白蛋白溶液，搅拌15min，在4℃、转速为10000r/min的条件下离心20 min得到沉淀，所述沉淀用所述重悬液重悬至离心前体积的1/10，再加入丙型肝炎病毒标记抗原，得到丙型肝炎病毒抗体检测免疫金。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述碳酸钾为0.2M碳酸钾；所述0.2M碳酸钾、所述丙型肝炎病毒标记单抗和所述丙型肝炎病毒标记抗原的比例为6uL/mL:5µg/mL:0.5µg/mL；所述牛血清白蛋白溶液为质量分数为10%的牛血清白蛋白溶液，所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金体积的1/10。