[发明专利]一种血必净中间体多指标成分的含量测定方法

权利要求书

1.一种血必净中间体有效成分的含量测定方法，其特征在于，步骤如下：

步骤一：以芍药苷为内参物的相对校正因子的测定

a、标准溶液的制备：

分别精密称取羟基红花黄色素A对照品、芍药苷对照品、阿魏酸对照品、苯甲酸对照品适量，置容量瓶中，以50％甲醇水溶液为溶剂，溶解并定容至刻度，制得含羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、苯甲酸一定浓度的对照品混标浓溶液；将混标浓溶液进行七步梯度稀释，使得各步稀释后的标准溶液中各成分浓度分别在供试品限度浓度的40％、60％、80％、100％、120％、140％、160％；

b、各组分校正因子计算：

采用两台不同高效液相色谱仪，取步骤a中制得的7个不同浓度的标准溶液进样，记录色谱图，分别以各成分相对应的浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标，按最小二乘法进行线性回归，绘制标准曲线，将羟基红花黄色素A、阿魏酸、苯甲酸标准曲线的斜率分别除以芍药苷标准曲线的斜率，即为各成分相对芍药苷的校正因子；

步骤二：按校正因子法测定供试品中羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、苯甲酸含量：

a、对照品工作溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，置容量瓶中，以50％甲醇水溶液为溶剂，制得含芍药苷浓度为C_R的对照品工作溶液；

b、供试品溶液制备：精密移取供试品，置容量瓶中，加50％甲醇水溶液稀释至刻度摇匀，作为供试品溶液；

c、测定方法：分别精密量取对照品混标工作溶液、供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，根据步骤一中确定的校正因子，按下述公式计算羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、苯甲酸含量，

式中：X——供试品中各成分的含量，mg/ml

C_R——对照品工作溶液中芍药苷浓度，mg/ml

A_R——对照品工作溶液中芍药苷峰面积

A_X——供试品溶液中各成分峰面积

F——各成分相对芍药苷的校正因子

其中，液相色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，

流动相：甲醇：醋酸水溶液，1000ml水中加入36％冰醋酸水溶液5ml，体积比10：90-30：70，

流速：0.8-1.2ml/min，

柱温：30℃，

检测波长：230nm，

进样量：20μl，

运行时间：60min；

所述血必净中间体多指标成分为羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、苯甲酸。

2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，液相色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，

流动相：甲醇：醋酸水溶液，1000ml水中加入36％冰醋酸水溶液5ml，体积比：20：80

流速：1.0ml/min，

柱温：30℃，

检测波长：230nm，

进样量：20μl，

运行时间：60min。

3.如权利要求2所述的含量测定方法，其特征在于，液相色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，

流动相：甲醇：醋酸水溶液，1000ml水中加入36％冰醋酸水溶液5ml，10：90

流速：0.8ml/min，

柱温：30℃，

检测波长：230nm，

进样量：20μl，

运行时间：60min。

4.如权利要求2所述的含量测定方法，其特征在于，液相色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，

流动相：甲醇：醋酸水溶液，1000ml水中加入36％冰醋酸水溶液5ml，体积比：30：70，

流速：1.2ml/min，

柱温：30℃，

检测波长：230nm，

进样量：20μl，

运行时间：60min。