[发明专利]一种证明NO与缝隙连接关系的实验方法

权利要求书

1.一种证明NO与缝隙连接关系的实验方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、尾动脉血压监测 使用全自动大小鼠无创血压测量仪检测WKY大鼠、SHR和NO干预组三组大鼠尾动脉血压；测量时先预热，将血压计的充气尾套套在大鼠尾根部，待大鼠安静后，重复测量血压3次，结果取其平均值；

步骤2、HE染色 10％水合氯醛麻醉，取脑基底动脉，置入福尔马林溶液固定48h后，经脱水、透明、浸蜡、包埋，待制作厚度3um的切片，然后进行HE染色，光学显微镜下观察脑血管基本结构和病理学改变；

步骤3、流式细胞术检测大鼠外周血T淋巴细胞亚群及CD4+和CD8+上Cx40的表达

①大鼠外周血淋巴细胞悬液制备

10％水合氯醛麻醉，采集腹主动脉血液3ml，离心，去上清，加入等体积PBS溶液，充分混匀，轻铺于等量淋巴细胞分离液上，离心，抽取中间白膜层部分，离心，弃上清，PBS溶液重悬，备用；

②外周血T淋巴细胞亚群和Cx40的检测

取3只流式染色管分别标记为空白管、同型对照管和测定管，各管分别加入50μL淋巴细胞悬液，测定管加入按照说明书要求不同剂量的CD3+、CD4+、CD8+、CD25+荧光抗体，空白对照管不加任何抗体，同型对照管加入相同荧光标记的同型抗体，充分混匀后室温避光孵育15min，PBS溶液重悬，上机；标记CD4+和CD8+的荧光抗体管中加入固定剂120μL，4℃孵育30min，加入破膜剂，根据说明书参考浓度加入山羊抗大鼠Cx40抗体、FITC标记的山羊抗小鼠IgG和FITC同型对照，37℃孵育30min，PBS溶液重悬，上机，上机使用CELLQuest软件进行检测。