[发明专利]黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌提高纤维素酶酶活的方法

说明书

本发明公开了一种黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌提高纤维素酶酶活的方法，该方法包括包括如下步骤：往洗净、烘干的稻谷壳上均匀喷雾粪碱纤维单胞菌菌液后进行培养，得到粪碱纤维单胞菌固定的内核，再往上均匀喷雾黑曲霉孢子液后进行培养，得到黑曲霉孢子与粪碱纤维单胞菌共同吸附在稻谷壳上的固定混合物；往固定混合物上喷雾培养基后继续培养，得到菌体继续培养的混合物，将其接入到成菌丝膜培养基中进行培养使稻谷壳外面形成菌丝薄膜层，得到黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌。本发明得到的黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌进行培养所产生的纤维素酶组成更为合理，纤维素酶酶活得到了提高；其经过简单的过滤就能重复利用。

技术领域

本发明涉及微生物组合产纤维素酶的方法，具体涉及一种黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌提高纤维素酶酶活的方法。

背景技术

纤维素酶（β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶）是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成。

黑曲霉是一种食品安全菌，产生的纤维素酶具有广阔的应用领域，比如污水处理、垃圾利用、食品等。由于黑曲霉产生的纤维素酶的外切酶酶活低，大大降低了其降解不溶状态纤维素的能力。要提升黑曲霉纤维素酶的降解能力，就需要大幅度提高其外切酶的活性，或者把非可溶的纤维素，变为可溶的纤维素。

粪碱纤维单胞菌具有外切纤维素的能力，如果能共同培养黑曲霉和粪碱纤维单胞菌，这样就能相对提高外切酶的活性，从而提高纤维素酶的催化活性。粪碱纤维单胞菌细胞为非菌丝态，把其细胞从发酵液中取出需要离心或微过滤等高耗费成本的工艺。如果黑曲霉能包裹粪碱纤维单胞菌，这样通过简单的过滤就能除去发酵液中的细胞。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点与不足，提供一种黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌提高纤维素酶酶活的方法以及通过该方法得到的黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌提高纤维素酶酶活的方法，包括如下步骤：

（1）往洗净、烘干的稻谷壳上均匀喷雾粪碱纤维单胞菌菌液后进行培养，得到粪碱纤维单胞菌固定的内核。

（2）往粪碱纤维单胞菌固定的内核上均匀喷雾黑曲霉孢子液后进行培养，得到黑曲霉孢子与粪碱纤维单胞菌共同吸附在稻谷壳上的固定混合物。

（3）往固定混合物上喷雾培养基后继续培养，得到菌体继续培养的混合物。

（4）菌体继续培养的混合物接入到成菌丝膜培养基中进行培养，使稻谷壳外面形成菌丝薄膜层，得到稻谷壳为固定核心的固定菌体物。所述的成菌丝膜培养基的配方为：胰蛋白胨0.1g，酵母提取物0.1g，氯化钠10g，PDA液体培养基100mL，水900mL。

上述得到的稻谷壳为固定核心的固定菌体物即为黑曲霉菌丝包裹粪碱纤维单胞菌，将其进行培养，所产生的纤维素酶组成更为合理，使纤维素酶酶活得到了提高；而且黑曲霉包裹粪碱纤维单胞菌经简单的帆布或纱布过滤后就能重复利用。

步骤（1）中所述的粪碱纤维单胞菌菌液的浓度优选为（0.8-2）×10⁷ /mL，喷雾量优选为100-300mL/kg；培养的条件优选为20-35℃培养20-30h。