[发明专利]特异性识别及灵敏检测人血清蛋白的荧光试剂合成方法

权利要求书

1.一种特异性识别及灵敏检测人血清蛋白的荧光试剂，该荧光试剂为席夫碱类有机化合物，其特征在于，该化合物结构式为：

2.根据权利要求1所述的特异性识别及灵敏检测人血清蛋白的荧光试剂，其特征在于，该荧光试剂还可鉴别牛血清蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的特异性识别及灵敏检测人血清蛋白的荧光试剂的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

称量二苯氨基-4-苯甲醛加入三颈瓶中，温度设定为80-90℃，加入无水乙醇，加热回流至刚好全溶；

称量4-氨基苯并-15-冠-5-醚，加入无水乙醇溶解，滴加到上述醛溶液中，冷凝回流4h，反应完成后静置过夜，析出黄绿色晶体，过滤，真空干燥得到产物特异性识别及灵敏检测人血清蛋白的荧光试剂，即DB-15C5。

4.根据权利要求1所述的荧光试剂在检测人血清蛋白上的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)测定溶液的配置，称量人血清蛋白的荧光试剂入无水乙醇中溶解，得到5.0×10^-3mol/L的母液，用保鲜膜和锡箔纸包裹好，密封，避光，置于冰箱中保存，同时，将人血清蛋白HSA，牛血清蛋白BSA，酪蛋白，肌红蛋白，白蛋白，血红蛋白，溶菌酶，细胞色素C分别以磷酸盐缓冲液配制成1.0×10^-4mol/L的蛋白储备液备用；

(2)荧光识别HSA方法

取人血清蛋白的荧光试剂母液10μL于石英荧光比色皿中，再加入1mL磷酸盐缓冲液或人工尿液，得到5.0×10^-5mol/L的待测液；加入上述的蛋白储备液200μL，在荧光分光光度计上设置360nm为激发波长，激发和发射狭缝分别调为2.5nm，5nm，在370～700nm范围进行扫描，得到人血清蛋白的荧光试剂在不同蛋白储备液中存在时的荧光光谱；

(3)定量测定HSA含量

通过人血清蛋白的荧光试剂在不同浓度HSA存在时的荧光光谱，固定发射波长500nm，读取荧光强度，以荧光强度I对HSA浓度C_HSA作图，建立得到标准曲线，测定人血清蛋白的荧光试剂在未知样品中的荧光强度，通过标准曲线得到HSA含量。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，荧光测定时溶液配制磷酸盐缓冲液所用水均为二次蒸馏水或更高纯度的水，人血清蛋白的荧光试剂溶液配制采用体积百分数为1％无水乙醇助溶。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液为由NaCl 8g，KCl0.2g，KH₂PO₄ 0.24g，Na₂HPO₄ 1.44g溶于1000mL水中配制而成，磷酸盐缓冲液的pH为7.2-7.4。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的人工尿液由尿素1.02068g，乳酸0.0099088g，柠檬酸0.042028g，碳酸氢钠0.210025g，氯化钙0.027745g，氯化钠0.52596g，七水硫酸镁0.049294g，硫酸钠0.14204g，磷酸二氢钾0.095263g，磷酸氢二钾0.159754g，氯化铵0.133725g溶于100ml蒸馏水并调节pH为6.0配制而成。