[发明专利]酿酒酵母高密度培养方法及其pH调控方法

权利要求书

1.一种酿酒酵母高密度培养的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

a. 发酵原料处理：糖蜜去渣沉淀，加酸酸化水解得到还原糖重量占20-25%的发酵型糖蜜，所述酸选自硫酸、盐酸、硝酸或磷酸中的一种或几种；

b. 种子培养：将斜面保存的菌株进行一级和二级种子培养；

c. 种子富集：离心、洗涤，富集得到酿酒酵母种子；

d. 发酵培养：将步骤c的酿酒酵母种子接入仅装有水的发酵罐内进行发酵培养，发酵罐内的通气比为1.6-2.5VVM，溶氧体积45-70%，在线实时监测菌体的生理状态，根据实时监测的生理参数调控流加补料的速率，所述生理参数包括二氧化碳释放速率、氧气摄入速率和呼吸商，所述调控过程除流加补料外无需额外添加无机盐、酸、碱和微量元素；

所述调控过程中的呼吸商值控制在0.6-1.2，当呼吸商值大于1.2时，降低补料的流加速率；当呼吸商值小于0.6时，提高补料的流加速率；

所述调控过程控制pH在4.2-6.0；

e. 发酵结束，分离洗涤，收集酿酒酵母菌体；

所述调控过程中流加的补料为糖蜜和酵母浸粉；

所述酿酒酵母菌株为酿酒酵母FX-2（Saccharomyces cerevisiae FX-2），该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO. M 2016418。

2.根据权利要求1所述的高密度培养方法，其特征在于，步骤b所述的一级种子培养使用的一级培养基的组成按重量计，包括：1-2%酵母膏，2-4%蛋白胨和2-4%葡萄糖；所述一级种子培养的接种量为按照每200-250mL一级培养基接种一环菌种计算，培养条件为28-32℃温度，200-300rpm转速下培养18-26小时。

3.根据权利要求1所述的高密度培养方法，其特征在于，步骤b所述的二级种子培养使用的二级培养基的组成按重量计，包括：2-4%葡萄糖，2-4%酵母浸粉，0.1-0.3%磷酸二氢钾和0.1-0.3%磷酸氢二钾，其pH控制在5.5-5.8；所述二级种子培养的接种量为二级培养基体积的10-15%，培养条件为28-32℃温度，200-300rpm转速下培养18-25小时。

4.根据权利要求2所述的高密度培养方法，其特征在于，步骤b所述的二级种子培养使用的二级培养基的组成按重量计，包括：2-4%葡萄糖，2-4%酵母浸粉，0.1-0.3%磷酸二氢钾和0.1-0.3%磷酸氢二钾，其pH控制在5.5-5.8；所述二级种子培养的接种量为二级培养基体积的10-15%，培养条件为28-32℃温度，200-300rpm转速下培养18-25小时。

5.根据权利要求1所述的高密度培养方法，其特征在于，步骤d的接种量为发酵罐内装液量体积的10-15%，发酵温度为26-35℃，压力为0.03-0.15MPa，时间为14-20小时。

6.根据权利要求2所述的高密度培养方法，其特征在于，步骤d的接种量为发酵罐内装液量体积的10-15%，发酵温度为26-35℃，压力为0.03-0.15MPa，时间为14-20小时。

7.根据权利要求3所述的高密度培养方法，其特征在于，步骤d的接种量为发酵罐内装液量体积的10-15%，发酵温度为26-35℃，压力为0.03-0.15MPa，时间为14-20小时。

8.根据权利要求4所述的高密度培养方法，其特征在于，步骤d的接种量为发酵罐内装液量体积的10-15%，发酵温度为26-35℃，压力为0.03-0.15MPa，时间为14-20小时。

9.根据权利要求1-8任一项所述的高密度培养方法，其特征在于，步骤c富集得到的酿酒酵母种子的湿重为400-700g/L。

10.根据权利要求1-8任一项所述的高密度培养方法，其特征在于，以干基计算，步骤e得到的酿酒酵母菌体密度为60-80g/L。