[发明专利]一种通过去热原纯化降纤酶的方法

权利要求书

1.一种通过去热原纯化降纤酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

（1）将降纤酶干粉用水溶解，依次加入乙醇、乙酸铵、磷酸钾溶液、乙酸钙溶液，搅拌，调节pH，搅拌，离心，取上清液；

（2）调节上清液pH，搅拌，加入95%乙醇进行沉淀，虹吸，离心，并用无水乙醇洗涤沉淀脱水，离心，干燥，得去除热原的降纤酶精品。

2.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于，步骤(1) 中所述降纤酶干粉是通过蛇毒干粉的溶解、亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化和冷冻干燥以得到的。

3.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：步骤(1) 中将降纤酶干粉按1:10-30(Kg:L)的比例加入纯化水中搅拌溶解。

4.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：步骤(1) 中加入纯化水溶解搅拌后，加入等体积的乙醇以及总体积的5％ (L:Kg) 的乙酸铵搅拌。

5.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：步骤(1) 中，按降纤酶干粉1:20-40(Kg:L)的比例加入0.1-0.4mol/L 磷酸钾溶液，搅拌30分钟后，再按降纤酶干粉1:20-40(Kg:L)的比例加入0.05-0.3mol/L的乙酸钙溶液。

6.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：步骤(2) 中用2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH 至9.0-10.0，搅拌2-3小时；3000rpm离心30分钟，弃去沉淀物取上清液。

7.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：步骤(2) 中上清液用2mol/L的盐酸溶液调节pH 至7.5-8.5，加入10倍量(V/V)95％乙醇，沉淀析出，静置过夜。

8.根据权利要求1 所述的方法，其特征在于：步骤(2) 中虹吸上层废乙醇，收集沉淀，3000rpm离心30分钟，沉淀物用无水乙醇脱水，3000rpm离心30分钟；将沉淀物真空干燥即得降纤酶成品。