[发明专利]薯蓣皂苷的偶联物及其制备方法与应用

说明书

薯蓣皂苷的偶联物及其制备方法与应用。本发明公开了一种通式(I)的薯蓣皂苷的偶联物，由薯蓣皂苷与产生免疫原性的载体物质钥匙孔蓝蛋白(KLH)偶联构成，其中n为与一个钥匙孔蓝蛋白分子结合的薯蓣皂苷的分子数，KLH为钥匙孔蓝蛋白，分子量范围是450KDa～13000KDa。本发明还公开了所述的偶联物的制备方法，即将薯蓣皂苷与产生免疫原性的载体物质连接起来，结合为具有诱发动物免疫系统产生抗体的偶联物。本发明的薯蓣皂苷的偶联物通过免疫新西兰大白兔，制备了效价达到1∶16000的抗血清，其最低检测限为0.53ng/ml。本发明具有简便，快捷，特异，准确的特点，为制备薯蓣皂苷的酶联免疫检测试剂盒提供了基础。

技术领域

本发明涉及一种小分子半抗原的偶联物及其制备方法与应用，尤其涉及薯蓣皂苷的偶联物及其制备方法与应用。

背景技术

本发明涉及的下列名称适用于整个说明书和权利要求书：

薯蓣皂苷：中国标准品质检所产品

KLH：钥匙孔蓝蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin)，Sigma公司产品

DMF：二甲基甲酰胺，北京百灵威(J&K)公司产品

高碘酸钠：北京百灵威(J&K)公司产品

透析袋：北京索莱宝(Solarbio)公司产品

PBS：磷酸缓冲液(Phosphate Buffer Saline)(0.01M，pH＝7.40)

CBS：碳酸盐缓冲溶液(Carbonate Buffer Saline)(0.05M，pH＝9.6)。

薯蓣皂苷(Dioscin)是薯蓣科植物穿山龙(Dioscorea nipponica Makino)药材的主要甾体皂苷类化学成分。薯蓣皂苷具有止咳、祛痰、脱敏、消炎的作用，亦有杀昆虫和抗须癣毛菌等真菌等的作用，并且可作为合成甾体激素及避孕药的原材料。近年来，薯蓣皂苷在抗肿瘤、降血糖、免疫调节、防治心脑血管疾病等方面的作用日益引起全世界的关注，含有薯蓣皂苷的药品(例如维奥欣)已上市，广泛应用于冠心病的预防和治疗。许多中药材、中药饮片和中成药中都含有薯蓣皂苷。因此，以薯蓣皂苷为指标性成分进行相关质量检测和鉴定分析有着重要的意义。

目前，薯蓣皂苷常用的测定方法有重量法、比色法、库伦法和薄层扫描法等，这些定量分析方法操作繁杂，专属性不强，准确度不高。近年发展了一些高灵敏度和高选择性的定量方法，如气相色谱法、高效液相色谱法及色谱光谱联用技术等。虽然这些方法准确，稳定，可靠，但是由于仪器法价格昂贵，费事较长，且造成有机溶剂污染，需要大型仪器设备，需要专门的技术人员，所以难于应用于现场操作。酶联免疫检测法(ELISA)提供了一种极好的检测手段。该方法具有快速，准确，简易，不需要专人操作等优点，这使得ELISA法成为一种理想的检测手段。酶联免疫检测法的核心是需要高质量的抗体。薯蓣皂苷是一种小分子有机化合物，不具有免疫原性，称之半抗原。所以，必须把薯蓣皂苷转化为能引发动物免疫系统产生抗体的免疫原(又称之为完全抗原)。经检索，世界上尚未有关于薯蓣皂苷的免疫原合成及抗体制备过程的报道，不能满足检测需要，因此研究薯蓣皂苷的免疫原的合成显得格外重要。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明要解决的问题是：提供一种能引发动物免疫系统产生针对薯蓣皂苷有特异反应的抗体的免疫原，即薯蓣皂苷的偶联物及其制备方法。同时，本发明还提供了所述的薯蓣皂苷的偶联物作为免疫原在制备薯蓣皂苷特异反应抗体中的应用。

本发明的薯蓣皂苷的偶联物，由薯蓣皂苷半抗原与产生免疫原性的载体物质偶联而成，所述载体物质为优选蛋白质，蛋白片段，合成多肽或半合成多肽。

上述的薯蓣皂苷的偶联物，其中所述产生免疫原性的载体物质是钥匙孔蓝蛋白。