[发明专利]一种油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法

说明书

本发明提供了一种油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法，包括以下步骤：将口蹄疫疫苗破乳后的抗原样品进行凝胶电泳；切取其中一个蛋白泳道进行染色确定目标蛋白的条带位置；再切取未染色凝胶上与经染色后的目标蛋白条带位置相同的凝胶进行样品处理；经处理后的胶块进行超声萃取，所得上清液进行真空冷冻干燥或者低温冷冻离心浓缩，即可。本发明通过将破乳后的抗原采用电泳进行分离纯化，提高了抗原的纯度，使纯化后的样品检测重复性良好，提高了检测结果的准确性，且可显著降低图谱信噪比，突出目标分子。且本发明在采用凝胶电泳纯化步骤中，特定采用部分染色的方式，可简化抗原处理步骤，同时增加抗原回收率，降低仪器维护成本。

技术领域

本发明涉及口蹄疫疫苗检测技术领域，具体涉及一种油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法。

背景技术

口蹄疫疫苗检测中，由于油佐剂中成分复杂，含有很多表面活性剂、免疫增强剂等杂质会溶于水相中，且使用现有的蛋白定性定量检测方法检测蛋白时极易受到杂质的干扰，造成数据波动，因此油佐剂疫苗经过破乳后直接使用蛋白定性定量检测方法会影响其检测过程，造成信号掩盖或干扰，压低了抗原信号的强度，甚至无法有效检测到其中的抗原，业内也没有能够去除上述杂质的方法，所以在破乳后引入纯化步骤以去除破乳后水相中的各类杂质，进而利于使用蛋白定性定量检测方法进行检测，解决破乳后样品中杂质对检测方法，反映更真实的样品状态。

现有技术中主流的样品纯化手段为各类层析，而层析过程所需要的样品量大，不仅会造成约30％～50％的样品损失(在起始样品量低时更易引起扩散作用)，同时对设备依赖性较高。油佐剂疫苗中的抗原浓度为微克级，经过破乳过程后会造成一部分抗原的损失，再使用层析的方式进行纯化，其抗原回收率极低，无法用于检测，若加大疫苗破乳量，则会造成疫苗浪费，且油佐剂中杂质会加速缩短层析填料使用寿命，其经济性不佳。

现有的凝胶电泳纯化技术中，所分离的复杂样品其成分均为生物分子及其同类物，而非其他复杂性质的物质，其中处理的样品成分相比于破乳后水相其样品状态更为简单。现有的蛋白质电泳后胶内酶解技术，其程序较多，步骤复杂，经过操作后其回收率低，微量样品经过处理后所能回收的样品已无法满足检测要求。

目前国内各大厂家都在探索一种实用的方法，能够对经破乳处理的疫苗中抗原进行处理，减少抗原中的杂质对其后续定性定量检测分析的影响。破乳后水相中存在的表面活性剂等物质在业内被公认为最难处理的杂质，业内现有技术并不能对破乳后水相直接进行检测。本发明中针对的样品成分复杂，且疫苗中蛋白浓度低并不适合传统纯化方法，破乳后水相中又含有的表面活性剂等杂质，不仅以游离状态存在，其双亲的性质还会与蛋白相结合，在电场力的作用下会使得杂质与蛋白的结合键打开，在凝胶中实现分离纯化。通过凝胶电泳的方式纯化相比传统方式其所需的样品量将大大减少，并大幅降低对操作人员及仪器设备的依赖性，同时可使与蛋白黏连的杂质与蛋白分离。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法，包括以下步骤：

S1、将口蹄疫疫苗破乳后的抗原样品进行凝胶电泳；

S2、切取其中一个蛋白泳道进行染色确定目标蛋白的条带位置；

S3、再切取未染色凝胶上与经步骤S2染色后的目标蛋白条带位置相同的凝胶进行样品处理；

S4、经处理后的胶块进行超声萃取，所得上清液进行真空冷冻干燥或者低温冷冻离心浓缩，即可。

优选地，步骤S1中，所述凝胶电泳的条件为：采用丙烯酰胺质量含量为5％的浓缩胶和丙烯酰胺质量含量为12％分离胶，210V电压下处理30-40min。。

优选地，步骤S2中，所述染色采用银染或者考染。