[发明专利]一种油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法有效
| 申请号： | 201611124382.4 | 申请日： | 2016-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN106769358B | 公开（公告）日： | 2020-01-24 |
| 发明（设计）人： | 俞爱敏;马贵军;石海芳 | 申请（专利权）人： | 申联生物医药(上海)股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N1/34 | 分类号： | G01N1/34 |
| 代理公司： | 31236 上海汉声知识产权代理有限公司 | 代理人： | 郭国中 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗原 染色 破乳 目标蛋白 凝胶电泳 条带位置 切取 真空冷冻干燥 口蹄疫疫苗 油佐剂疫苗 电泳 超声萃取 蛋白泳道 低温冷冻 分离纯化 检测结果 抗原样品 离心浓缩 目标分子 染色凝胶 样品处理 样品检测 仪器维护 上清液 信噪比 胶块 凝胶 回收率 图谱 | ||
1.一种油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法，其特征在于，由以下步骤组成：
S1、将口蹄疫疫苗破乳后的抗原样品进行凝胶电泳；
S2、切取其中一个蛋白泳道进行染色确定目标蛋白的条带位置；
S3、再切取未染色凝胶上与经步骤S2染色后的目标蛋白条带位置相同的凝胶进行样品处理；
S4、经处理后的胶块进行超声萃取，所得上清液进行真空冷冻干燥或者低温冷冻离心浓缩，即可；
所述抗原样品为对经破乳处理后得到的水相溶液进行超滤、洗滤后，再进行冻干或浓缩所得；
步骤S3中，所述样品处理具体包括以下步骤：
A1、将未染色的含目标蛋白的胶块经ddH2O清洗、乙腈震荡脱水后，加入含二硫苏糖醇的NH4HCO3水溶液进行第一次孵育；
A2、经第一次孵育后的胶块用乙腈震荡脱水后，再加入含碘乙酰胺的NH4HCO3水溶液进行第二次孵育；
所述第一次孵育条件为：56℃下孵育30min；第二次孵育条件为：RT避光孵育20min。
2.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法，其特征在于，步骤S1中，所述凝胶电泳采用的条件为：采用丙烯酰胺质量含量为5％的浓缩胶和丙烯酰胺质量含量为12％分离胶，210V电压下处理30-40min。
3.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法，其特征在于，步骤S2中，所述染色采用银染或者考染。
4.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法，其特征在于，所述超声萃取的温度为0-8℃，超声15min，重复3次。
5.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗破乳后水相的纯化方法，其特征在于，所述超声萃取采用的萃取液为乙腈质量含量80％、甲酸质量含量5％的混合溶液；或乙腈质量含量80％、三氟乙酸质量含量0.05％的混合溶液。
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