[发明专利]一种封闭IL6R的用于缓解CRS的CAR-T转基因载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种封闭IL6R的用于缓解细胞因子释放综合症的CAR-T转基因载体，其特征在于，包括：

用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.1所示；

用于质粒复制的原核复制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.2所示；

用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40 Ori序列，如SEQ ID NO.3所示；

用于增强转基因的表达效率的eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件，如SEQID NO.11所示；

用于嵌合抗原受体基因的真核转录的人EF1α启动子，如SEQ ID NO.12所示；

用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件；

编码人IL6R的人源化单链抗体的核苷酸序列，所述人IL6R的人源化单链抗体为如SEQID NO.21所示的IL6RscFv1，或者如SEQ ID NO.22所示的IL6RscFv2，或者如SEQ ID NO.23所示的IL6RscFv3；

用于共同转录表达蛋白质的IRES核糖体结合序列，如SEQ ID NO.25所示；

编码IL6信号肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.26所示；

编码人源抗体Fc段的核苷酸序列，如SEQ ID NO.27所示；

以及编码用于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR或三代CAR的嵌合抗原受体的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述编码人IL6R的人源化单链抗体的核苷酸序列为如SEQ ID NO.21所示的IL6RscFv1。

3.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述慢病毒包装顺式元件采用第二代慢病毒载体包括：如SEQ ID NO.5所示的慢病毒5 terminal LTR、如SEQ ID NO.6所示的慢病毒3terminal Self-Inactivating LTR、如SEQ ID NO.7所示的Gag顺式元件、如SEQ ID NO.8所示的RRE顺式元件、如SEQ ID NO.9所示的env顺式元件、以及如SEQ ID NO.10所示的cPPT顺式元件。

4.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述慢病毒包装顺式元件采用第三代慢病毒载体包括：如SEQ ID NO.5所示的慢病毒5 terminal LTR、如SEQ ID NO.6所示的慢病毒3terminal Self-Inactivating LTR、如SEQ ID NO.7所示的Gag顺式元件、如SEQ ID NO.8所示的RRE顺式元件、如SEQ ID NO.9所示的env顺式元件、如SEQ ID NO.10所示的cPPT顺式元件，以及如SEQ ID NO.4所示的RSV启动子。