[发明专利]一种封闭PDL1的用于抑制免疫逃脱的CAR-T转基因载体及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种封闭PDL1的用于抑制免疫逃脱的CAR‑T转基因载体，包括：含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列(SEQ ID NO.1)；原核复制子pUC Ori序列(SEQ ID NO.2)；病毒复制子SV40Ori序列(SEQ ID NO.3)；eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件(SEQ ID NO.11)；人EF1α启动子(SEQ ID NO.12)；用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件；人PDL1的人源化单链抗体PDL1scFv1(SEQ ID NO.21)、PDL1scFv2(SEQ ID NO.22)、或PDL1scFv3；(SEQ ID NO.23)；IRES核糖体结合序列(SEQ ID NO.25)；IL6信号肽(SEQ ID NO.26)；人源抗体Fc段(SEQ ID NO.27)；以及用于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR或三代CAR的嵌合抗原受体。此外，本发明还公开了该载体的构建方法及其在制备抑制免疫逃脱的药物中的应用。

技术领域

本发明属于医学生物领域，具体涉及一种载体，尤其涉及一种封闭PDL1的用于抑制免疫逃脱的CAR-T转基因载体。此外，本发明还涉及该载体的构建方法和应用。

背景技术

肿瘤免疫治疗的理论基础是免疫系统具有识别肿瘤相关抗原、调控机体攻击肿瘤细胞(高度特异性的细胞溶解)的能力。1950年代，Burnet和Thomas提出了“免疫监视”理论，认为机体中经常会出现的突变的肿瘤细胞可被免疫系统所识别而清除，为肿瘤免疫治疗奠定了理论基础[Burnet FM.Immunological aspects of malignant disease.Lancet,1967；1:1171-4]。随后，各种肿瘤免疫疗法包括细胞因子疗法、单克隆抗体疗法、过继免疫疗法、疫苗疗法等相继应用于临床。

2013年一种更先进的肿瘤免疫疗法---CAR-T疗法成功用于临床，并表现了前所未有的临床疗效。CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。CAR-T疗法在临床上最领先的有诺华的CLT019，采用CLT019治疗复发难治急性淋巴细胞白血病患者，六个月的肿瘤无进展生存率达到67％，其中最长的应答时间达到两年多。总部位于中国上海的上海优卡迪生物医药科技有限公司与医院合作，共治疗复发难治急性淋巴细胞白血病患者36例，其中完全24例，缓解比例达到66.6％。这是抗癌研究的颠覆性突破。CAR-T细胞疗法可能是最有可能治愈癌症的手段之一，并被《Science》杂志评为2013年度十大科技突破之首。

CAR-T疗法虽然效果显著，但是在治疗实体肿瘤的过程中遇到很多困难，其中一个很重要的原因就是PD1/PDL1抑制性免疫检查点(如图1A所示)，它们结合传递抑制信号，抑制了T细胞的免疫活性，在免疫耐受中发挥了重要作用，同时也是促使肿瘤细胞逃逸的重要原因。