[发明专利]一种封闭PDL1的用于抑制免疫逃脱的CAR-T转基因载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种封闭PDL1的用于抑制免疫逃脱的CAR-T转基因载体，其特征在于，包括：

用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.1所示；

用于质粒复制的原核复制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.2所示；

用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40 Ori序列，如SEQ ID NO.3所示；

用于增强转基因的表达效率的eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件，如SEQID NO.11所示；

用于嵌合抗原受体基因的真核转录的人EF1α启动子，如SEQ ID NO.12所示；

用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件；

人PDL1的人源化单链抗体，所述人PDL1的人源化单链抗体为如SEQ ID NO.21所示的PDL1scFv1、或者如SEQ ID NO.22所示的PDL1scFv2、或者如SEQ ID NO.23所示的PDL1scFv3；

用于共同转录表达蛋白质的IRES核糖体结合序列，如SEQ ID NO.25所示；

IL6信号肽，如SEQ ID NO.26所示；

人源抗体Fc段，如SEQ ID NO.27所示；

以及用于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR或三代CAR的嵌合抗原受体；

所述用于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR的嵌合抗原受体包括：如SEQ IDNO.13所示的CD8 leader嵌合受体信号肽、如SEQ ID NO.14所示的BCMA单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.15所示的Optimal Linker C、如SEQ ID NO.16所示的BCMA单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.17所示的CD8 Hinge嵌合受体铰链、如SEQ ID NO.18所示的CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区、如SEQ ID NO.19所示的CD137嵌合受体共刺激因子、如SEQ ID NO.20所示的TCR嵌合受体T细胞激活域；

所述用于组成集识别、传递、启动于一体的三代CAR的嵌合抗原受体包括：如SEQ IDNO.13所示的CD8 leader嵌合受体信号肽、如SEQ ID NO.14所示的BCMA单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.15所示的Optimal Linker C、如SEQ ID NO.16所示的BCMA单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.17所示的CD8 Hinge嵌合受体铰链、如SEQ ID NO.18所示的CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区、如SEQ ID NO.19所示的CD137嵌合受体共刺激因子、如SEQ ID NO.20所示的TCR嵌合受体T细胞激活域、以及如SEQ ID NO.28所示的CD28嵌合受体共刺激因子。

2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述人PDL1的人源化单链抗体为如SEQ IDNO.21所示的PDL1scFv1。

3.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述慢病毒包装顺式元件采用第二代慢病毒载体包括：如SEQ ID NO.5所示的慢病毒5 terminal LTR、如SEQ ID NO.6所示的慢病毒3terminal Self-Inactivating LTR、如SEQ ID NO.7所示的Gag顺式元件、如SEQ ID NO.8所示的RRE顺式元件、如SEQ ID NO.9所示的env顺式元件、如SEQ ID NO.10所示的cPPT顺式元件。

4.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述慢病毒包装顺式元件采用第三代慢病毒载体包括：如SEQ ID NO.5所示的慢病毒5 terminal LTR、如SEQ ID NO.6所示的慢病毒3terminal Self-Inactivating LTR、如SEQ ID NO.7所示的Gag顺式元件、如SEQ ID NO.8所示的RRE顺式元件、如SEQ ID NO.9所示的env顺式元件、如SEQ ID NO.10所示的cPPT顺式元件，以及如SEQ ID NO.4所示的RSV启动子。