[发明专利]肺炎链球菌多糖-蛋白质缀合物及其制取方法和用途

说明书

一种具有免疫原性的多糖‑蛋白质缀合物，由高压均质处理过的肺炎链球菌荚膜多糖与蛋白质组成的缀合物，具有免疫原性，可用于肺炎链球菌结合疫苗的制备。本发明提供的制备具有免疫原性的多糖‑蛋白质缀合物的方法，采用物理降解法对纯化的荚膜多糖进行降解，使得参与共价结合的多糖反应物溶解度增加，溶液粘度降低，避免了反应中凝胶现象的发生，利于反应的进行，便于对多糖‑蛋白质缀合物进行纯化。

技术领域

本发明涉及一种共价缀合物，尤其涉及一种多糖和蛋白质通过共价结合而得的缀合物，以及制取该种缀合物的方法，和在肺炎链球菌疫苗制取中的应用。

背景技术

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是链球菌属下的一种球状的革兰氏阳性菌，具有d溶血性。由肺炎链球菌引致的肺炎是在年幼或年长的人中最经常出现。肺炎链球菌也是一种普遍导致成人感染细菌性脑膜炎的病菌。此外，肺炎链球菌亦会导致不同种类的疾病，如：急性鼻窦炎、中耳炎、骨髓炎、脓毒性关节炎、心内膜炎、腹膜炎、心囊炎和蜂窝组织炎等。

治疗由肺炎链球菌疾病大多会使用B内酰胺类抗生素。早期，差不多所有肺炎链球菌的菌株都对青霉素敏感，随着抗生素使用率的提高，病菌对抗生素的抵抗亦发生上升的趋势。

自2000年起，一种七价的肺炎链球菌结合疫苗在美国被建议使用，主要适合2个月～23个月大的婴儿或2岁～5岁的孩童，可以保护孩童免受肺炎链球菌的深层感染，如：败血病及脑膜炎。

肺炎链球菌在人和动物体内可产生荚膜。根据荚膜内多糖抗原性的不同已将肺炎球菌分为91个血清型。

中国发明专利申请200680017776.8公开了一种多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物，其包含13种不同的多糖-蛋白质缀合物，以及生理学上可接受的载体，其中每种缀合物包含缀合到载体蛋白的来自不同血清型的肺炎链球菌的夹膜多糖，并且所述夹膜多糖从血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F制备，其中所述载体蛋白是CRM197。

肺炎链球菌荚膜多糖的相对分子质量较大，通常在1,000KD～3,000KD。对于含有多糖的免疫原性物质，多糖的相对分子质量的数值是保证抗原性的一个重要指标。相对分子质量越大，抗原性越强，相对分子质量的降低可能伴随着抗原性的损失。但对于多糖-蛋白质的缀合物，巨大的多糖分子在与蛋白质载体结合的过程中存在很多技术问题，诸如：多糖的溶解度过低、多糖溶液的粘度过高、结合反应过程中容易产生交联形成凝胶，以及结合物复杂和纯化困难等，由此导致缀合物中反应剂的残留量较大，游离多糖含量较高，反应收率较低，并且缀合物的最佳免疫原性与结合物中多糖片段的分子大小有密切关系。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物，便于缀合物的制取和分离，免疫原性亦得到保留。

本发明的另一个目的在于提供一种制取具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物的方法，优化荚膜多糖与载体蛋白的结合工艺，提高结合效率和缀合物收获率，提高缀合物原液的稳定性和免疫原性，便于后续的纯化和应用。

本发明的再一个目的在于提供一种具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物在制备肺炎链球菌结合疫苗中的应用。

一种具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物，由来自于肺炎链球菌(血清型如：1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、16F、17F、18C、19A、19F、20、20F、23A、23F和33F)的荚膜多糖，荚膜多糖的分子量为150,000Da～400,000Da(尤其是200,000Da～300,000Da)与蛋白质组成的缀合物。

另一种具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物，由来自于18C血清型肺炎链球菌荚膜多糖的分子量为150,000Da～400,000Da与CRM197蛋白质组成的缀合物。