[发明专利]一种间充质干细胞无血清培养基及其配制方法和应用

权利要求书

1.一种间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，是由9倍体积基础培养基与1倍体积的浓缩添加剂混合而成；

混合后基础培养基中各组分的终浓度如下：

DMEM-LG培养基粉末10g/L；Purmorphamine 1-5μM；胰岛素5.0-15.0mg/L；转铁蛋白0.5-2.0mg/L；乙醇胺0.2-1.0mg/L；L-抗坏血酸-2-磷酸5-20μmol/L；2-巯基乙醇0.5- 1.0×10^-5mol/L；L-谷氨酰胺100-200mg/L；L-丙氨酰-L-谷氨酰胺20-100mg/L；亚硒酸钠1-5mg/L；丙酮酸钠100-200mg/L；硫酸亚铁0.5-1.0mg/L；氯化锌0.2-0.5mg/L；地塞米松0.5-1.0nmol/L；碳酸氢钠 1500-2500mg/L；4-羟乙基哌嗪乙磺800-1500mg/L；

配制的浓缩添加剂组分及浓度：

人血清白蛋白15-25g/L；纤黏连蛋白5-15mg/L；α-抗胰蛋白酶1-10mg/L；亚油酸 2.5-7.5mg/L；亚麻酸2-10mg/L；卵磷脂1-5mg/L；BMP-7 1-10μg/L；Wnt5a 100-150μg/L；EGF 10-100μg/L；bFGF 50-150μg/L；PDGF 5-20μg/L；TGF-β 1-10μg/L。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，是由9倍体积基础培养基与1倍体积的浓缩添加剂混合而成；

混合后基础培养基中各组分的终浓度如下：

DMEM-LG 培养基粉末 10g/L；Purmorphamine 2.5μM；胰岛素 10.0mg/L；转铁蛋白0.60mg/L；乙醇胺0.4mg/L；L-抗坏血酸-2-磷酸15μmol/L；2-巯基乙醇 1.0×10^-5mol/L； L-谷氨酰胺150mg/L；L-丙氨酰-L-谷氨酰胺50mg/L；亚硒酸钠2.5mg/L；丙酮酸钠150mg/L；硫酸亚铁0.8mg/L；氯化锌0.4mg/L；地塞米松1.0nmol/L；碳酸氢钠2000mg/L；4-羟乙基哌嗪乙磺酸 1000mg/L；

配制的浓缩添加剂组分及浓度：

人血清白蛋白 20g/L；纤黏连蛋白 10mg/L；α-抗胰蛋白酶 5mg/L；亚油酸 5mg/L；亚麻酸 5mg/L；卵磷脂 2mg/L；BMP-7 5μg/L；Wnt5a 125μg/L；EGF 50μg/L；bFGF 100μg/L；PDGF10μg/L；TGF-β 2μg/L。

3.权利要求1或2所述的间充质干细胞无血清培养基的配制方法，其特征在于，

1)基础培养基的配制方法如下：

取超纯水，先充分溶解DMEM-LG培养基粉末，一边溶解一边搅拌，再依次加入Purmorphamine、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺、L-抗坏血酸-2-磷酸、2-巯基乙醇、L-谷氨酰胺、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、亚硒酸钠、丙酮酸钠、硫酸亚铁、氯化锌、地塞米松、碳酸氢钠及4-羟乙基哌嗪乙磺酸，充分溶解后，用浓盐酸调整pH值，用氯化钠调整渗透压，补加超纯水至900ml，过滤除菌，4℃保存；

2)浓缩添加剂配制方法如下：

取超纯水，放入37℃的水浴锅中，恒温搅拌，先加入人血清白蛋白，搅拌充分溶解；在37℃恒温的条件下，边搅拌边缓慢地滴入亚油酸，完全加入后再搅拌使充分溶解；按加入亚油酸的方法，依次加入亚麻酸及卵磷脂；最后37℃恒温的条件下，再依次加入细胞因子EGF、PDGF、bFGF、TGF-β、BMP-7及Wnt5a，边加入边搅拌，使充分溶解，补加超纯水至100ml，过滤除菌，-20℃避光保存；

3)基础培养基与浓缩添加剂按照9：1的体积比混合。