[发明专利]一种干细胞培养液及注射液

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、脐带间充质干细胞样本采集、处理；

步骤2、脐带间充质干细胞的原代提取及培养：用物理剪切的方法分离间充质的组织，以组织块贴壁培养法培养脐带间充质干细胞；用淋巴细胞分离液离心分离单个核细胞，以贴壁培养的方式分离培养脐带间充质干细胞；所述贴壁培养中采用CO₂培养箱；所述CO₂培养箱的条件为：37℃、12%的氧气、5%二氧化碳、83%氮气的低氧条件；

步骤3、脐带间充质干细胞的传代培养：当细胞达到60%以上融合时，清洗两次后加入细胞消化液，过滤去除组织小块，离心弃上清后，获得原代间充质干细胞；原代间充质干细胞用无血清培养基重悬后，接种在培养瓶或培养皿内，待细胞融合度达到80%-90%时，收集第一代间充质干细胞，作为种子细胞或继续传代培养；

步骤4、脐带间充质干细胞的生物学及流式细胞鉴定；

步骤5、取配制的脐带间充质干细胞培养液，对脐带间充质干细胞换液，继续培养脐带间充质干细胞，并收集脐带间充质干细胞培养上清；

步骤6、将步骤5中收集的脐带间充质干细胞培养上清经0.22μm滤膜过滤，收集滤液，即为脐带间充质干细胞注射液；

所述脐带间充质干细胞培养液，由以下原料按体积百分数组成：复方氨 基酸注射液10%、注射用水溶性维生素1%、丙氨酰谷氨酰胺0.5%、人血白蛋白10%、水解蛋白注射液10%、微量元素注射液0.5%、勃脉力A液68%；pH值为6.8-7.0，渗透压为310；

所述无血清培养基是在DMEM/F12基础培养基中加入10%血清替代品。

2.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞注射液的制备方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞培养液的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、取勃脉力A液，溶解于注射用水溶性维生素，得混合液；

步骤2、分别将步骤1的混合液、复方氨基酸注射液、丙氨酰谷氨酰胺、人血白蛋白、水解蛋白注射液、微量元素注射液、勃脉力A液，按比例混匀，即为脐带间充质干细胞培养液。

3.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞注射液的制备方法，其特征在于，所述步骤1中样本处理采用酒精浸泡时间1-4min，所述酒精经0.22μm孔径滤膜过滤除菌。

4.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞注射液的制备方法，其特征在于，所述步骤3中接种的密度为5000-6000个/cm²。

5.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞注射液的制备方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞培养液的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、取1%勃脉力A液，溶解于注射用水溶性维生素，得混合液；

步骤2、分别将步骤1的混合液、复方氨基酸注射液、丙氨酰谷氨酰胺、人血白蛋白、水解蛋白注射液、微量元素注射液、67%勃脉力A液，按比例混匀，即为脐带间充质干细胞培养液。

6.如权利要求1-5所述的脐带间充质干细胞注射液的制备方法，其特征在于，所述的脐带间充质干细胞注射液应用于人体静脉注射，注射剂量为200ml /次。