[发明专利]一株来源于蚕沙的菌株Bacillus altitudinis SEM-1及其应用

权利要求书

1.一株来源于蚕沙的高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）SEM-1，已于2016年5月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO.60038。

2.权利要求1所述的高地芽孢杆菌SEM-1在制备土壤微生物菌剂或生物有机肥中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述高地芽孢杆菌SEM-1用于制备高地芽孢杆菌原粉，包括如下制备步骤：

（1）活化菌种

活化高地芽孢杆菌SEM-1菌株，从斜面中挑取菌落并在NA固体培养基划线培养，培养条件32℃，待SEM-1在NA固体培养基上生长18-24h后，挑取单菌落，用于一级种子液的制备；

（2）一级种子液的制备

选取NA固体培养基上的单菌落，接种于一级种子摇瓶中，将一级种子摇瓶在NB液态培养基、32℃、200r/min下培养12-14h，得到一级种子液；

（3）二级种子液的制备

种子罐中的培养基仍为NB液体培养基，121℃下，灭菌20min，将一级种子液接入种子罐中，接种量体积比为0.5~1%；培养条件为：通气比1:1，搅拌转速为250~400r/min，培养温度32℃，罐压0.05MPa，培养时间为10小时，培养结束时得到二级种子液，其活菌含量为1~3×10⁷cfu/mL，OD值在0.7~0.8；

（4）高地芽孢杆菌SEM-1的菌液发酵

发酵培养基配方按重量百分比：玉米淀粉2-3%，豆粕粉1.5-2.5%，酵母膏0.5~1%，CaCO₃0.3-0.6%，K₂HPO₄ 0.02-0.03%，MgSO₄·7H₂O 0.015-0.025%，MnSO₄·H₂O 0.015-0.025%，(NH₄)₂SO₄ 0.05-0.15%；pH 6.5-7.5，121℃灭菌30min；

将高地芽孢杆菌SEM-1的二级种子液，按照接种量体积比为0.5~1%接入发酵罐中，培养条件为：通气比1:（1-1.5），搅拌转速为200-400r/min，培养温度32℃，罐压0.05MPa，保持5%以上的溶氧条件，培养时间为48h；下罐时间以取样镜检芽孢90%以上释放为准，成熟发酵液中高地芽孢杆菌SEM-1活芽孢含量为50～80×10⁸cfu/mL，得到发酵成熟菌剂；

（5）高地芽孢杆菌原粉的制备

步骤（4）所得的发酵成熟菌剂经碟片离心机或微滤设备浓缩后，加入轻质碳酸钙，发酵成熟菌剂与轻质碳酸钙的重量比为100:3，得到液固混合物，将该液固混合物搅拌30 min后，利用输料泵将液固混合物送入离心式喷雾塔中干燥，得到高地芽孢杆菌SEM-1原粉。