[发明专利]一种吉他霉素化学发光酶联免疫检测试剂盒

权利要求书

1.一种吉他霉素化学发光酶联免疫检测试剂盒用于检测猪或禽类的动物性食品中吉他霉素药物残留量的用途，其特征在于，所述试剂盒包括盒体、设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；

所述酶标板选择乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶标板，酶标板的各孔包被有以吉他霉素与卵清蛋白偶联制成的包被抗原，所述包被抗原浓度优选1.0μg/mL；所述的包被溶液为：1.75g碳酸钠和2.72g碳酸氢钠溶于1L水中，并调节pH为9.5后制得；所述酶标板采用将吉他霉素药物-卵清蛋白偶联物置于设定的包被溶液中，在37℃恒温箱中反应包被，包被液采用的是pH-9.5的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液；采用的包被抗原浓度为1.0μg/mL，包被好的微孔板可以用封闭溶液封闭，封闭溶液为：10g卵清蛋白溶于1L洗涤溶液中，再加入重量百分比为0.02％的NaN₃后制得；

所述设在盒体内的试剂包括：吉他霉素单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、吉他霉素系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；

所述吉他霉素单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的序列结构分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；所述吉他霉素单克隆抗体用洗涤溶液稀释成1：50000的工作浓度；具体而言，SEQ ID NO.1为EVKVEESGGGLVQPGGIVSPQGFKDEWCLLTLPMNWVRQSPEKGYYPMSRMRHCNGHSVTQLNTKAKGRFTMSRDDSKSSVYLQMSHMCMNMMNRQQCTSIYYDNLYYAMDYWGQGTSVTVSS，SEQ ID NO.2为DILMTQSPASLSASVGHINWPCIGNLCSPSCYLAWYQQKQGKSPQLLVYYAKTLLFNNPITKYDMCLVERIAPSLKINSLRPCTGIWKMCWPLEVITFGGGTKLEIKR；

所用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体为辣根过氧化酶-羊抗鼠IgG原液，使用时用洗涤溶液配制成1：6000的工作浓度；

所述吉他霉素系列标准溶液从吉他霉素纯品中稀释得到，所用稀释液为含有10％甲醇的0.05mmol/L、pH-7.5的PBS，吉他霉素标准品浓度分别是0μg/L，0.1μg/L，0.5μg/L，1.0μg/L，5μg/L和10μg/L，所述百分比为体积百分比；

所述浓缩磷酸盐缓冲液由5.24g NaH₂PO₄·2H₂O和33.6g Na₂HPO₄·12H₂O溶于1L去离子水中制得；

所述浓缩洗涤液为按体积百分比在0.05％，pH为7.4，浓度为0.1mol/L的盐缓冲液中添加0.05％的吐温-20后制得；

所述化学发光溶液包括A液和B液，其中，A液为：鲁米诺0.02M、对甲苯酚0.002M，PH-8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液；B液为100mL含2.0g柠檬酸、2.35g无水Na₂HPO₄和0.70mL浓度0.75％的过氧化脲的溶液。