[发明专利]一种具有抗氧化活性的蛋白肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及水产食品加工技术领域，具体地涉及一种具有抗氧化活性的蛋白肽及其制备方法。

背景技术

蛋白质经过酶解得到多肽，使其蛋白质的结构发生改变，疏水区的活性官能基团暴露，随着肽键的裂解，小分子蛋白肽和氨基酸增加，从而可以提供质子或电子源，保持较高的氧化还原电位，使其具有清除活性自由基的能力。氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类是一个重要的代谢过程，但是它却导致了自由基的形成。活性氧自由基(ROS)被认为能引起氧化应激。在食品体系中，脂类或蛋白质可能会受到ROS的攻击经历氧化过程，从而导致食品产生不愉快味道，颜色发暗，同时也可能产生潜在的毒性终产物。抗氧化多肽的应用能防止食品成分由于捐献电子给活性氧自由基以及中和活性氧自由基的负面作用而变质。抗氧化肽在医学、化妆品、生物、食品领域有广泛的应用价值。

化学合成抗氧化肽不同程度上损伤人体的肝脏、肾脏等器官，部分国家和地区已经明确限量或禁止使用。因此，研发高效、安全的天然抗氧化剂成为热点。食用级抗氧化肽的安全性要求更高，抗氧化性较其他体内抗氧化生物分子更为显著，可以稳定脂质或含脂质产品。天然的抗氧化多肽因分子量小、易吸收、活性强等特点。目前天然抗氧化肽主要是通过酶解大豆蛋白、奶酪、乳清蛋白、动物胶、面筋等各种食物蛋白获得。最近几年发展到海洋产品如海藻、虾皮、两栖动物裸露皮肤分泌物、真菌等。

有关天然抗氧化活性肽的制备方法，现有技术的不足在于大多数蛋白肽酶解过程中通过添加酸或碱调节pH，明显地影响产品的风味，同时产品的灰分较高。

目前还没有以鱼肉为原料制备抗氧化肽的报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是在于提供一种具有抗氧化活性的蛋白肽。

本发明的另一目的在于提供上述蛋白肽的制备方法。

本发明的再一个目的在于提供上述蛋白肽的应用。

为了实现上述技术目的，本发明提供了一种具有抗氧化活性的蛋白肽及其制备方法，包括以下步骤:

(1)超声处理去脂的鱼肉浆液；

(2)加入复合蛋白酶进行酶解，酶解过程无需添加酸或碱调节pH值；

(3)对酶解液离心并取上清液进行超滤；

(4)滤液过柱层析分离，收集洗脱峰，洗脱液通过反向高效液相色谱进行分离即得。

可选的，所述鱼肉为淡水鱼肉或海水鱼肉。在本发明的实施例中选用鳙鱼和鳕鱼。

在本发明的一个实施例中，步骤(1)所述去脂的鱼肉浆液通过以下方法制备得到：洗净鱼肉，用打浆机将鱼肉打成浆，得鱼肉浆；然后向鱼肉浆中加入0.8-2.0倍鱼肉重量的水，在85-95℃下水浴10-15min，再用分散均质机在8000-10000rpm下匀浆1-3min，得鱼肉浆液；通过6000-8000g离心10-15min，去上层脂肪，得到去脂的鱼肉浆液。本领域技术人员应当理解，去脂的鱼肉浆液的制备方法包括但不限于上述方法。

步骤(1)超声处理方法为将去脂的鱼肉浆液温度调至50-65℃，30-45kH的超声频率处理15-25min。

本发明通过大量实验发现，鱼肉浆液温度调至50-65℃进行超声处理，效果最好，能够较好地改变鱼肉蛋白的组织结构，使下面酶解步骤在较短酶解时间和较小的用酶量就能够获得优质的蛋白肽。

步骤(2)酶解加入的复合蛋白酶为碱性蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶，三者质量比为(2-3):(1-2):(1-2)，且加入的复合蛋白酶总质量与鱼肉质量比为1：300-500。

优选地，所述碱性蛋白酶为Alcalase 2.4L碱性蛋白酶。

步骤(2)中酶解条件为55-65℃酶解2-5h。

步骤(2)酶解后将酶解液在95-100℃下保温3-5min，冷却至室温。

步骤(3)离心条件为5000-7000g 10-15min；采用2000D的超滤膜进行超滤。

在本发明的一个实施例中，是利用孔径为2000道尔顿的陶瓷膜对步骤(2)所得的上清液进行超滤，收集滤液，再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，流速为0.8mL/min，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第1个洗脱峰；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，反相HPLC的分离条件是以5-90％乙腈溶液(0-5min乙腈溶液为5％，5-40min乙腈溶液从5％到40％，40-50min乙腈溶液从40％到90％)作为洗脱液，流速为5-8mL/min，得到含抗氧化活性肽的溶液。