[发明专利]诱导裂藻微生物在含宿主藻的半固体平板上形成趋化环的方法

权利要求书

1.团聚拉布伦茨氏菌(Labrenzia sp.)KD531菌株，该菌株保藏编号为CCTCC NO：M2016378。

2.裂藻微生物裂解液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将对数期生长的三角褐指藻原液接种于灭菌的f/2培养基中培养，获得藻液；

2)将步骤1)所得藻液灭菌，得液体PTF培养基；

3)将权利要求1所述的团聚拉布伦茨氏菌(Labrenzia sp.)KD531接种于步骤2)所得的液体PTF培养基培养，得菌液；

4)将步骤3)所得菌液与浓缩后的藻液混合后倒双层平板，具体方法如下：

配制琼脂浓度为1.2％的f/2培养基作为下层培养基，配制琼脂浓度为0.7％的f/2培养基为上层培养基并分装至5mL/管；取50mL处于对数生长周期的藻液于4000g离心5min后倒去上清，用1mL的灭菌f/2培养基重悬沉淀形成浓缩藻液；将步骤3)得到的菌液和浓缩藻液与50℃上层培养基按照体积比为100μL︰1mL︰5mL混合后倒入下层培养基上，待琼脂凝固后倒置于光照培养箱内培养至出现明显的空斑现象；

5)挖取步骤4)出现的单个空斑，用f/2培养基浸泡，按照1︰10的体积比加入到新鲜的生长至对数期的三角褐指藻藻液中，感染一周后得裂解液；

6)将步骤5)得到的裂解液按步骤4)重新倒双层平板，再按步骤5)获得变澄清的裂藻微生物裂解液。

3.如权利要求2所述裂藻微生物裂解液的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述接种的接种量是按对数期生长的三角褐指藻原液︰f/2培养基＝1︰10；所述f/2培养基的组成为：75mg NaNO₃,5mg NaH₂PO₄·H₂O，4.36mg Na₂EDTA·2H₂O，3.15mg FeCl₃·6H₂O，0.01mgCoCl₂·6H₂O，0.18mg MnCl₂·4H₂O，0.006mg NaMoO₄·2H₂O，0.1mg thiamine·HCl，0.5μgvitamin B₁₂，0.5μg biotin，溶解于1L经0.45μm膜过滤的海水中；所述培养是于20±1℃，12h光照，12h黑暗，50μmol photons m^-2s^-1光照强度条件下培养14d。

4.如权利要求2所述裂藻微生物裂解液的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述灭菌的条件为：121℃，21min。

5.如权利要求2所述裂藻微生物裂解液的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述培养的条件是置于27℃摇床，180rpm震荡培养10d。

6.如权利要求2所述制备方法制备的裂藻微生物裂解液在裂解产油微藻细胞壁中应用。