[发明专利]新型嵌合抗原受体及其用途

说明书

本发明公开了具有光诱导元件的重组嵌合抗原受体，包括抗原结合区、跨膜结构区、共刺激信号传导区和T细胞信号传导区功能结构域，在重组嵌合抗原受体的N端、C端或者各功能结构域之间插入光诱导元件。本发明运用分子克隆方法将光诱导元件LOV2基因克隆入质粒Lenti‑EF1α‑CD19CAR构建具有光诱导元件的重组嵌合抗原受体的共表达载体，利用293T细胞包装获得带有光诱导CAR分子的慢病毒载体。本发明所述重组嵌合抗原受体通过慢病毒载体在T细胞中表达后，T细胞的杀伤毒性受到LOV2的可逆控制，为CAR‑T提高临床治疗癌症的安全性提供了重要途径。

技术领域

本发明涉及生物医学转化领域，尤其涉及具有光诱导元件的重组嵌合抗原受体及其编码基因与应用。

背景技术

免疫系统是人体的防御体系，一方面发挥着清除细菌、病毒、外来异物的功能，另一方面消除体内衰老细胞及发生突变的细胞，有的突变细胞会变成癌细胞。癌症免疫治疗正是通过人为的干预，来调动机体自身的免疫系统对癌细胞进行杀灭和抑制其增殖。

过继性细胞免疫治疗（adoptive cellular immunotherapy，ACI）是指将体外激活的自体或异体免疫细胞输注给患者，以杀伤患者体内的肿瘤细胞，是目前治疗恶性肿瘤的重要手段之一，已在多种实体瘤和血液肿瘤的临床治疗中取得较好疗效。其中，嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）T细胞治疗法是近年来发展非常迅速的一种新的细胞免疫治疗技术，通过基因工程技术修饰效应T细胞，克服肿瘤局部免疫抑制微环境和宿主免疫耐受状态，提高了抗肿瘤的靶向性、杀伤性和持久性。

CAR结构由胞外抗原结合区、跨膜结构区和胞内信号转导区组成。胞外抗原结合区主要是抗原特异性单克隆抗体单链的重链（VL）和轻链（VH）的可变区组成，二者以铰链区连接形成单链抗体（single chain fragment varible，scFv）。CAR通过识别肿瘤抗原的scFv和胞内信号域“免疫受体酪氨酸活化基序（immunoreceptor tyrosine-based activationmotifs, ITAM）”在体外进行基因重组，通过基因转染技术修饰患者的T淋巴细胞，使患者T淋巴细胞表达肿瘤抗原受体，经过纯化和大规模扩增修饰后的T淋巴细胞，称为嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞（CAR-T）。

CAR技术临床上在血液系统肿瘤和实体瘤的治疗上取得了显著成绩( Grupp SA,Kalos M, Barrett D, et al. Chimeric antigen receptor-midified T cells foracute lymphoid leukemia [J]. N Engl J Med, 2013,368:1509-1518.Davila ML,Riciere I, Wang X, et al. Efficiacy and toxicity management of 19-28z CAR Tcell therapy in B cell acute lymphoblastic leukemia [J]. Sci Transl Med.2014,6:224-225.