[发明专利]一种寡雄腐霉原生质体的制备和再生方法与复合酶解液

权利要求书

1.一种寡雄腐霉原生质体的制备和再生方法，其特征是包括如下步骤：

a. 菌丝体制备：将培养在平板上的寡雄腐霉菌丝孢子混合体刮下来，用渗透压稳定剂洗涤，离心收集菌丝孢子混合体；

b. 原生质体制备：向每1g收集到的菌丝孢子混合体中加入2～6mL 1% lysing enzyme，2～6mL 1% cellulase和50～300 U lyticase复合酶解液进行酶解，获得寡雄腐霉原生质体；

c. 原生质体纯化：过滤除去上述获得的原生质体与菌丝孢子的混合物，离心收集纯化后的寡雄腐霉原生质体；

d. 原生质体再生：用渗透压稳定剂洗涤重悬原生质体，在液体再生培养基中振荡培养。

2.根据权利要求1所述的原生体制备和再生方法，其特征在于所述渗透压稳定剂为0.6～0.8 mol/L甘露醇溶液，25 mmol/L CaCl₂和10 mmol/L Tris-HCl， pH值为7.5。

3.根据权利要求1或2所述的原生体制备和再生方法，其特征在于所述复合酶解液酶解寡雄腐霉菌丝孢子混合体的酶解条件为：30℃，80rmp,酶解2～3h。

4.根据权利要求3所述的原生质体制备和再生方法，其特征在于所述纯化离心条件为5500rpm，室温离心10min。

5.根据权利要求4所述的原生质体制备和再生方法，其特征在于所述液体再生培养基为加入渗透压稳定剂的液体PDA培养基，pH值为7.5。

6.用于制备寡雄腐霉原生质体的复合酶解液，其特征在于针对每1g寡雄腐霉菌丝孢子混合体使用的复合酶解液由：2～6mL 1% lysing enzyme，2～6mL 1% cellulase和50～300 U lyticase构成。