[发明专利]可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体是可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法。

背景技术

神经胶质瘤是最常见的中枢神经系统肿瘤，高级别胶质瘤具有极强的侵袭能力，因此通过手术、防、化疗等治疗方式效果都不是很好，倾向于复发，预后比较差，极大的威胁着人们的身体健康。但有研究发现，并不是所有的胶质瘤细胞都可以无限制增殖，仅脑胶质瘤干细胞具有无限增殖和自我更新能力，因此对胶质干细胞进行分离，培养，对研究胶质的发生、复发、侵袭机制以及进行有效治疗具有非凡意义。

发明内容

本发明的目的在于提供可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法，步骤简单，对进一步研究胶质瘤发生、复发、侵袭机制提供基础。

可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法：包括胶质瘤干细胞分离、胶质瘤干细胞粘附培养。

第一步进行胶质瘤干细胞分离，具体步骤包括：(1)从病人脑内新鲜获得的胶质瘤组织放于含有15％PS的神经干细胞基础培养基，冰上运输；(2)取出组织，放于含有15％PS的神经干细胞基础培养基漂洗两次，并用显微外科手术剪刀剪除血管等杂物；(3)10cm培养皿中显微外科手术剪刀剪碎组织，加入5ml预温的accumax消化酶，37℃消化30分钟，每5分钟吹打一次；(4)5倍体积消化酶量的15％PS的神经干细胞基础培养基终止反应，1000转，5分钟，离心；(5)15％PS的神经干细胞基础培养基清洗2次；(6)计数，2×10⁶细胞/孔(6孔板)接种；37℃5％CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中继续培养。

第二步进行胶质瘤干细胞粘附培养，冻存，具体步骤包括：(1)上述细胞，成球后，accumax消化酶，37℃消化成单细胞，1000转，5分钟，离心；(2)计数，传代于matrigel包被的6孔板，密度为2×10⁵细胞/孔；传代第二天换液，余隔天换液；(3)密度大于90％，accumax消化酶消化成单细胞，传代或冻存(冻存液：GSC培养基：DMSO＝9:1)。

本发明的有益效果：本发明提供的胶质细胞原代培养方法简单易于操作，胶质瘤干细胞贴壁原代培养成功率高。

具体实施方式

为更进一步阐述本发明，以患者胶质瘤细胞原代培养为实施例，对本发明做进一步详细说明。

可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法：包括胶质瘤干细胞分离、胶质瘤干细胞悬浮液培养和胶质瘤干细胞粘附培养。

第一步进行胶质瘤干细胞分离，具体步骤包括：(1)从病人脑内新鲜获得的胶质瘤组织放于含有15％PS的神经干细胞基础培养基，冰上运输；(2)取出组织，放于含有15％PS的神经干细胞基础培养基漂洗两次，并用显微外科手术剪刀剪除血管等杂物；(3)10cm培养皿中显微外科手术剪刀剪碎组织，加入5ml预温的accumax消化酶，37℃消化30分钟，每5分钟吹打一次；(4)5倍体积消化酶量的15％PS的神经干细胞基础培养基终止反应，1000转，5分钟，离心；(5)15％PS的神经干细胞基础培养基清洗2次；(6)计数，2×10⁶细胞/孔(6孔板)接种；37℃5％CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中继续培养。

第二步进行胶质瘤干细胞粘附培养，冻存，具体步骤包括：(1)上述细胞，成球后，accumax消化酶，37℃消化成单细胞，1000转，5分钟，离心；(2)计数，传代于matrigel包被的6孔板，密度为2×10⁵细胞/孔；传代第二天换液，余隔天换液；(3)密度大于90％，accumax消化酶消化成单细胞，传代或冻存(冻存液：GSC培养基：DMSO＝9:1)。