[发明专利]可用于神经发育研究的胶质细胞原代培养模型的制备方法在审
| 申请号： | 201610437800.9 | 申请日： | 2016-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN106609264A | 公开（公告）日： | 2017-05-03 |
| 发明（设计）人： | 袁国红;赵曙红;刘彬;刘庆柱 | 申请（专利权）人： | 袁国红 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100000 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，具体是可用于神经发育研究的胶质细胞原代培养模型的制备方法。具体步骤包括第一步，取活生物，处死灭菌后，取出脑组织去除血污；第二步，将所述第一步处理的全脑移入培养皿中,剔除脑表面的脑膜和血管,冲洗后留大脑半球；第三步，将第二步处理的脑组织剪碎并研磨，加入5ml 0.05％胰酶，移入离心管，至于37℃细胞培养箱孵育消化30分钟；第四步，消化至无明显的脑组织团块，终止消化，制成单细胞悬液。第五步，离心，弃上层清液。第六步，制成细胞悬液，接种于培养板中,37℃培养。本发明的方法简单易于操作，胶质细胞培养成功率高。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 神经 发育 研究 胶质 细胞 培养 模型 制备 方法 | ||
【主权项】：
可用于神经发育研究的胶质细胞原代培养模型的制备方法：第一步，取活生物，脱臼处死，用医用酒精浸泡灭菌后断头,迅速剪开颅骨，取出脑组织放到盛有含有15％青链霉素的冷PBS液的培养皿中反复冲洗以去除血污；第二步，将所述第一步处理的全脑移入另一盛有含有15％青链霉素的冷PBS液的培养皿中,用小镊子轻轻剔除脑表面的脑膜和血管,用PBS液冲洗后剪去脑干仅留大脑半球；第三步，将第二步处理的脑组织剪碎并研磨，加入5ml 0.05％胰酶，再移入50mL离心管，至于37度细胞培养箱孵育消化30分钟；第四步，每隔5min取出用吸管反复吹打消化至肉眼观察无明显的脑组织团块，加入10ml含有5％青链霉素的Advanced DMEM/F12终止消化，再次反复吹打制成单细胞悬液。第五步，离心，在1000r/min的离心机上离心5min后，弃上层清液。第六步，加完全培养液再次制成细胞悬液，1×106/孔接种于matrgal包被的6孔培养板中,置于5％CO2恒温细胞培养箱，37℃培养。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于袁国红，未经袁国红许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610437800.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法-201610164349.8
- 崔淑芳;杨文静;汤球;孙伟 - 中国人民解放军第二军医大学
- 2016-03-22 - 2019-11-08 - C12N5/079
- 本发明涉及细胞生物学技术领域，特别涉及一种裸鼹鼠小胶质细胞的分离纯化和培养方法。本发明综合使用多种培养基从新生裸鼹鼠大脑皮层分离并纯化培养小胶质细胞，摸索出了适于变温的啮齿类哺乳动物裸鼹鼠小胶质细胞的合理培养方法。本发明方法能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的裸鼹鼠小胶质细胞，低氧条件下的培养能够保证这种细胞在离体环境中依然能够保持在体状态下的生物学特性，从而便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究裸鼹鼠小胶质细胞的特殊生理功能，从而为探索其中的生物学机制并应用于临床相关领域提供重要的理论依据。
- 一种人视网膜Muller细胞的分离及培养方法-201810346628.5
- 不公告发明人 - 江苏齐氏生物科技有限公司
- 2018-04-18 - 2019-10-29 - C12N5/079
- 本发明提供了一种原代人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：(1)无菌取出角膜捐献者手术切除的正常眼球；(2)解剖显微镜下，无菌剥离视网膜组织；(3)加入混合胶原酶消化；(4)终止消化，过滤，离心，洗涤，用完全培养基重悬，接种培养瓶；(5)置于37℃，5%CO2培养箱培养；(6)细胞传代和纯化；(7)细胞形态观察与鉴定。本发明提供的一种人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，操作简单，稳定，高效，为进一步研究视网膜病变损伤发生机制提供了良好的实验材料。
- 源于骨髓神经嵴细胞的施旺氏祖细胞及其在促进神经再生中的应用-201610338493.9
- 施海燕;丁斐;强亮;余英奇;孙晓婷;胡静静;孙晓欢;何欢 - 南通大学
- 2016-05-20 - 2019-10-29 - C12N5/079
- 本发明涉及组织工程技术领域，具体涉及一种源于骨髓神经嵴细胞的施旺氏祖细胞及其在促进神经再生中的应用。本发明提供了一种大鼠骨髓源神经嵴祖细胞N1，保藏号为CCTCC NO：C201647，即BM‑NCC克隆N1，具备施旺氏祖细胞(SCP)的性能。本发明还提供了BM‑NCC克隆N1的传代培养方法，以及向施旺氏细胞(SC)定向诱导分化的方法。本发明的BM‑NCC克隆N1有望应用于细胞为基础的促神经再生治疗。
- 一种突触前膜分离方法-201910528361.6
- 石天尧;冯书芳;周文霞;张永祥 - 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
- 2019-06-18 - 2019-10-15 - C12N5/079
- 本发明公开了一种突触前膜分离方法，该方法包括如下步骤：将离体脑组织置于蔗糖‑HEPES缓冲液中匀浆后，于1000g下离心，所得上清液再于12000g下离心，得到的沉淀P2用EDTA‑HEPES缓冲液重悬，于12000g下离心，得到的沉淀P3用Tritonx‑100‑NaCl‑HEPES缓冲液重悬，于12000g下离心，所得上清液再于50000g下离心，得到的沉淀P6用Tris‑HCl缓冲液重悬，于10000g下离心，得到主要是突触前膜成分的上清液S7。与现有技术相比，本发明的方法不需要制备密度梯度介质溶液，操作更为简单，对脑中小核团的样本组织同样适用。
- 利用无血清培养基从成纤维细胞中获得神经细胞的方法-201610952074.4
- 郑辉;何松蔚;陈金龙 - 中国科学院广州生物医药与健康研究院
- 2016-11-02 - 2019-10-11 - C12N5/079
- 本发明涉及一种利用无血清培养基从成纤维细胞中获得神经细胞的方法，主要涉及向细胞的基础培养基中添加少量代血清添加剂、酪氨酸激酶类生长因子以及小分子化合物，获得一种新型的无血清培养基，以及使用该新型无血清培养基将不同来源的体细胞直接转分化为神经细胞的方法。利用本发明制得的无血清培养基可以在不借助外源性转录因子高表达的条件下，将不同来源的体细胞直接转分化为神经细胞。为今后神经细胞在临床疾病治疗中应用提供技术支撑。
- 利用自体免疫细胞制备视网膜色素上皮细胞薄片的方法-201810474706.X
- 刘明录;郭爱萍;韩国英;金海锋;刘玉;强邦明;冯建海;张传鹏 - 山东兴瑞生物科技有限公司
- 2018-05-17 - 2019-10-08 - C12N5/079
- 一种利用自体免疫细胞制备视网膜色素上皮细胞薄片的方法，包括如下步骤：S1、从病人自身外周血获取自体免疫细胞，经过体外去分化为多功能诱导干细胞；S2、将步骤S1得到的多功能诱导干细胞经定向诱导分化生成视网膜色素上皮细胞，从而制备得到视网膜色素上皮细胞薄片。本发明使用的RPE来源于病人自身免疫细胞，然后移植到同一个病人，这样降低病人的免疫排斥反应。除此之外，不存在组织配型和伦理方面的问题；因此，本发明试验在伦理方面和术后的结果，对开展此类临床试验都没有任何障碍。并且，此发明对黄斑病变的治疗有很好的前景。
- 一种裸鼹鼠少突胶质前体细胞培养方法-201610164348.3
- 崔淑芳;杨文静;孙伟;汤球 - 中国人民解放军第二军医大学
- 2016-03-22 - 2019-09-27 - C12N5/079
- 本发明涉及细胞生物学技术领域，特别涉及一种裸鼹鼠少突胶质前体细胞的分离纯化和培养方法。本发明综合使用多种培养基从裸鼹鼠胎鼠大脑皮层分离并纯化培养少突胶质前体细胞，摸索出了适于变温的啮齿类哺乳动物裸鼹鼠少突胶质前体细胞的合理培养方法。本发明方法能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的裸鼹鼠少突胶质前体细胞，低氧条件下的培养能够保证这种细胞在离体环境中依然能够保持在体状态下的生物学特性，从而便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究裸鼹鼠少突胶质前体细胞的特殊生理功能，从而为探索其中的生物学机制并应用于临床相关领域提供重要的理论依据。
- 一种裸鼹鼠星形胶质细胞培养方法-201610164346.4
- 崔淑芳;杨文静;孙伟;汤球 - 中国人民解放军第二军医大学
- 2016-03-22 - 2019-09-27 - C12N5/079
- 本发明涉及细胞生物学技术领域，特别涉及一种裸鼹鼠星形胶质细胞的分离纯化和培养方法。本发明综合使用多种培养基从新生裸鼹鼠大脑皮层分离并纯化培养星形胶质细胞，摸索出了适于变温的啮齿类哺乳动物裸鼹鼠星形胶质细胞的合理培养方法。本发明方法能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的裸鼹鼠星形胶质细胞，低氧条件下的培养能够保证这种细胞在离体环境中依然能够保持在体状态下的生物学特性，从而便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究裸鼹鼠星形胶质细胞的特殊生理功能，从而为探索其中的生物学机制并应用于临床相关领域提供重要的理论依据。
- 神经嵴细胞培养液、神经嵴间充质干细胞的制备方法及神经嵴间充质干细胞的应用-201910512451.6
- 蒋晓华;黄嘉维 - 香港中文大学深圳研究院
- 2019-06-13 - 2019-09-17 - C12N5/079
- 本发明涉及干细胞与再生医学领域，特别涉及神经嵴细胞培养液、神经嵴间充质干细胞的制备方法及神经嵴间充质干细胞的应用。本发明的实验结果表明经人全能干细胞诱导分化而成神经嵴干细胞谱系间充质干细胞可以显著改善新生大鼠缺血缺氧模型神经功能障碍，降低缺血区域面积，抑制免疫反应和促进脑组织内源性修复。从而证明人神经嵴来源的间充质干细胞具有显著改善新生儿缺血缺氧性脑病后的炎症反应及有效促进神经功能恢复的作用。本发明还提供了可用于鉴定神经嵴间充质干细胞活性的检验指标。
- MSCs来源的少突胶质细胞的制备方法及试剂盒-201710508337.7
- 张洪钿;苑春慧 - 北京再生生物科技研究院有限公司
- 2017-06-28 - 2019-09-17 - C12N5/079
- 本发明公开了一种MSCs来源的少突胶质细胞制备试剂盒，包括OPCs无血清基础培养基、OPCs培养添加剂1、OPCs培养添加剂2及OPCs培养表面包被液，其中，所述OPCs无血清基础培养基为含有B27，N2，L‑谷氨酰胺，1,25‑二羟维生素D3，三碘甲状腺氨酸，人褪黑素的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养添加剂1为含有重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养添加剂2为含有重组人血小板来源生长因子AA、重组人神经营养因子3的DMEM/F12培养基；所述OPCs培养表面包被液为含有重组人层黏连蛋白、重组人玻连蛋白的DMEM/F12培养基。
- 一种外诱导间充质干细胞分化为临床治疗用神经前体细胞、制备方法及其应用-201910467060.7
- 张涛;张海天 - 无锡芯超生物科技有限公司
- 2019-05-31 - 2019-08-27 - C12N5/079
- 本发明涉及一种体外诱导间充质干细胞分化为临床治疗用神经前体细胞的制备方法，包括以下步骤分离干细胞、干细胞的扩增和干细胞诱导体系的获得临床治疗用神经前体细胞，所述制备方法获得的临床治疗用神经前体细胞通过腰穿途径治疗病人，可用于治疗病人的临床难治性神经系统疾病，所述体外诱导间充质干细胞诱导分化为临床用神经前体细胞制备方法的整个体外过程中，未接触任何含异体和异种动物源的成分，从时间上可以大大缩短神经干细胞、神经元的生长周期，诱导细胞长势良好，无排斥反应，其提供的微环境更利于MSCs化为神经样细胞,更符合临床干细胞移植的需要，从而解决其他培养基和刺激因子所带来的诸多问题。
- 一种锦鲤脑细胞系的构建方法及其应用-201510531300.7
- 王英英;王庆;曾伟伟;李莹莹;石存斌;吴淑勤 - 中国水产科学研究院珠江水产研究所
- 2015-08-26 - 2019-07-16 - C12N5/079
- 本发明公开了一种锦鲤脑细胞系的构建方法及其应用，将锦鲤脑组织先放入含胶原酶和胰蛋白酶消化液A中进行消化，收集细胞，再加入含EDTA‑4Na的消化液B中进行消化，收集消化后的细胞进行原代培养和传代培养即可获得锦鲤脑细胞系；本发明针对锦鲤脑组织细胞的特征，采用胶原酶和胰蛋白酶联合消化法分离脑组织细胞，进行原代培养，继而成功构建了锦鲤脑细胞系，已连续传至100代以上，可提供大量的锦鲤脑来源细胞，且细胞能维持良好的生长状态，可以对其进行冷冻保存。本发明锦鲤脑细胞系对锦鲤疱疹病毒具有敏感性，接毒后均出现细胞病变，电镜观察可以发现增殖的病毒粒子，本发明细胞系可以直接应用于病原特性研究及疫苗研制。
- 菝葜皂苷元用于诱导间充质干细胞神经分化的用途-201910288738.5
- 王二;赵艺婧;其他发明人请求不公开姓名 - 南京温博生物科技有限公司
- 2019-04-11 - 2019-07-12 - C12N5/079
- 本发明公开了菝葜皂苷元用于诱导间充质干细胞神经分化的用途。Nestin为神经干细胞标记物中的一种，表达于胚胎发育早期；NSE是神经元细胞所特有的一种酸性蛋白；MAP‑2是一种主要存在于神经元细胞的胞体和树突中的蛋白，对突触的生长具有重要作用。Nestin、NSE和MAP‑2都是神经细胞的标记性蛋白，其表达水平可以反映间充质干细胞向神经细胞的分化水平。本发明发现，骨髓间充质干细胞经过菝葜皂苷元诱导后向神经细胞的分化能力增强，具有和阳性药类似的作用。因此，菝葜皂苷元可以用于体外诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化，可制成商品化的分化培养基。
- 一种视网膜色素上皮细胞的培养方法-201711474638.9
- 方攀峰;谢磊;范国平;闫占海 - 江苏艾尔康生物医药科技有限公司
- 2017-12-29 - 2019-07-09 - C12N5/079
- 本发明公开了一种视网膜色素上皮细胞的培养方法，其包括以下步骤：(1)将视网膜色素上皮细胞按照3×104‑4×104/cm2的密度接种于细胞板或细胞瓶中；(2)所述细胞培养230‑250小时后，消化；使用所述方法，视网膜色素上皮细胞在冻存复苏后具有高细胞活性。
- 木犀草素在诱导间充质干细胞向神经细胞定向分化中的用途-201510549503.9
- 陆华;高小平;刘志斌;周天秀;米玲;刘芊辰 - 成都中医药大学
- 2015-08-31 - 2019-07-05 - C12N5/079
- 本发明公开了木犀草素在诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞中的用途。本发明还公开了诱导间充质干细胞向神经细胞定向分化的诱导液及诱导分化方法。本发明木犀草素可以诱导间充质干细胞定向分化为神经细胞，可以为治疗神经损伤提供了原材料，临床应用前景良好。
- 一种消化RPE细胞的方法-201711430944.2
- 范国平;闫占海;方攀峰;李宁;谢磊 - 江苏艾尔康生物医药科技有限公司
- 2017-12-26 - 2019-07-02 - C12N5/079
- 本发明公开了一种消化RPE细胞以解除其细胞贴壁状态的方法，包括以下步骤：(1)使用1×TrypLE select，使其均匀覆盖于RPE细胞；(2)使用Dispase II溶液，使其均匀覆盖于RPE细胞，其中步骤(1)和(2)是分步实施。
- 一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法-201811635494.5
- 董强;崔梅;国敏;陈兴栋;赵鸿琛;丁梦媛 - 复旦大学附属华山医院
- 2018-12-29 - 2019-06-21 - C12N5/079
- 本发明涉及一种采用快速免疫磁珠法分离脑脊液中不同细胞来源外泌体亚型的方法，具体步骤包括：(1)对脑脊液进行预处理；(2)加入PE标记的一抗进行分选；(3)加入免疫磁珠；(4)增加磁场，进行分离。与现有技术相比，本发明精准分离中枢神经系统不同细胞来源的外泌体亚群，可供针对性的对中枢疾病以及不同靶细胞外泌体深入研究。
- 3β-肉桂酰基薯蓣皂苷元在间充质干细胞诱导分化中的应用-201910288748.9
- 王二;赵艺婧;其他发明人请求不公开姓名 - 南京温博生物科技有限公司
- 2019-04-11 - 2019-06-21 - C12N5/079
- 本发明公开了3β‑肉桂酰基薯蓣皂苷元在间充质干细胞诱导分化中的应用。Nestin为神经干细胞标记物中的一种，表达于胚胎发育早期；NSE是神经元细胞所特有的一种酸性蛋白；MAP‑2是一种主要存在于神经元细胞的胞体和树突中的蛋白，对突触的生长具有重要作用。Nestin、NSE和MAP‑2都是神经细胞的标记性蛋白，其表达水平可以反映间充质干细胞向神经细胞的分化水平。本发明发现，骨髓间充质干细胞经过3β‑肉桂酰基薯蓣皂苷元诱导后向神经细胞的分化能力增强，具有和阳性药类似的作用。因此，3β‑肉桂酰基薯蓣皂苷元可以用于体外诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化，可制成商品化的分化培养基。
- 一种基于Matrigel制备组织工程角膜缘的方法-201910094620.9
- 李阳;王云明;李贵刚;王玮;王平;高晴琴;周华民 - 华中科技大学
- 2019-01-31 - 2019-06-18 - C12N5/079
- 本发明属于组织工程相关技术领域，并公开了一种基于Matrigel制备组织工程角膜缘的方法。该方法包括：(a)将Matrigel冻融，然后将冰球或干冰球加入其中搅拌混合获得固液混合物；(b)将固液混合物中的Matrigel成胶，该过程中，固液混合物中的冰球或干冰球融化在成胶后的Matrigel中留下孔隙，使得获得的Matrigel基质胶具有多孔结构；(c)在获得的具有多孔结构的Matrigel基质胶中种植角膜缘干细胞及角膜缘微环境细胞，使其在多孔结构中形成三维立体结构获得所需的组织工程角膜缘。本发明具备流程简单，易于实施，工艺条件及Matrigel多孔结构便于控制等优势。
- 一种肝性脑病细胞模型及其构建方法-201910134467.8
- 陈永平;金晓芝;陈达之;吴发玲;张磊;潘彤彤 - 温州医科大学附属第一医院
- 2019-02-23 - 2019-06-14 - C12N5/079
- 本发明属于脊椎动物的新品种技术领域，公开了一种肝性脑病细胞模型及其构建方法，大鼠星形胶质细胞、神经元细胞的分离、纯化及细胞培养小室里共培养，加入不同浓度氯化铵后形成肝性脑病细胞模型；解决了目前肝性脑病主要采用动物模型，其成本高，耗费时间长，及过于复杂的体内环境对实验结果易产生偏差；而现有的有关肝性脑病的细胞模型均过于粗糙、简单，不能很好的模拟疾病过程的问题。本发明一种肝性脑病细胞模型的建立，尤其是以星形胶质细胞、神经元细胞共培养及不同浓度高氨为设计对象的模型，对肝性脑病的研究及治疗十分重要。
- 一种中脑多巴胺能神经前体细胞及其制备方法和应用-201910169525.0
- 焦璐琰;俞君英;张颖;张东明;许晗 - 安徽中盛溯源生物科技有限公司
- 2019-03-06 - 2019-06-14 - C12N5/079
- 本发明涉及干细胞生物学领域，尤其涉及一种中脑多巴胺能神经前体细胞及其制备方法和应用。本发明公开了一种中脑多巴胺能神经前体细胞，其表达Lmx1a+、Foxa2+、En1+和Otx2+，其中所述中脑多巴胺能神经前体细胞不表达Nkx2.1、DBX1和GBX2中的一种或者多种。制备该中脑多巴胺能神经前体细胞的方法，包括以下步骤：形成拟胚体、得到中脑底板细胞和得到中脑多巴胺能神经前体细胞。该制备方法能够快速高效的从人多能干细胞分化获得中脑多巴胺能神经细胞，解决了现有的分化方法时间较长、效果不稳定、效率低及利用了含血清的培养体系或滋养层细胞不利于后续临床级细胞制剂的生产等问题。
- 一种视网膜高趋化性的大鼠视网膜小胶质细胞系-201310459318.1
- 倪颖勤;徐格致;蒋小爽;张萌;江睿;刘天津 - 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院
- 2013-09-30 - 2019-05-21 - C12N5/079
- 本发明属微生物动物细胞系领域，涉及一种视网膜高趋化性的大鼠视网膜小胶质细胞系及其建立方法。本细胞系为鼠源性细胞，与原代培养的视网膜小胶质细胞有不到1%的基因差异且均不涉及主要功能蛋白；能自我增殖，连续传代；能表达单核‑巨噬细胞表面抗原CD11b(OX42),ED1(OX6)、具有吞噬能力并且在LPS的刺激下能分泌TNF‑а、IL‑1β与iNOS等致炎因子；经体内移植后能被高效定向募集到视网膜损伤部位并存活，进一步促进光感受器存活。本发明细胞系可用于视网膜光感受器变性疾病的防治研究，并可作为从外周‑中枢（视网膜）的药物载体。
- 人角膜缘微环境细胞的分离和培养方法及其组合鉴定方法-201811581933.9
- 李贵刚;王玮;徐玲娟;李阳;王云明 - 华中科技大学同济医学院附属同济医院
- 2018-12-24 - 2019-05-17 - C12N5/079
- 本发明公开了一种人角膜缘微环境细胞的分离和培养方法及其组合鉴定方法，该方法先获得角膜缘小片；用胶原酶A消化，然后用胰蛋白酶溶液进行消化，然后再接种于包被有Matrigel基质胶的六孔板上，获得原代的LNC；将原代的LNC置于改良的MESCM胚胎干细胞培养液连续培养传代扩增；采用Matrigel包被塑料培养板表面，MESCM无血清培养基扩增即得到人角膜缘微环境细胞。鉴定方法包含细胞形态学检测、细胞表面标志物检测、细胞多向诱导分化潜能检测和体外支持角膜缘干细胞活性检测共4种方法。本发明分离培养的人LNC细胞，具有明确的形态、抗原、功能特征，可以用于实验研究或者临床移植材料。
- 获得和维持纯化或富集的哺乳动物神经干细胞群和/或神经祖细胞群的培养方法-201811129309.5
- 城户常雄 - 城户常雄
- 2012-01-12 - 2019-05-14 - C12N5/079
- 本发明提供了分离的可扩增的人神经干细胞或祖细胞，其中所述细胞为祖细胞或干细胞，保持了其分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，保持了其在整个后续传代中有效分化为少突胶质细胞谱系细胞的能力，并且所述细胞至少表达细胞表面抗原CD133和CD140α。本发明还提供了一种在体外培养分离自哺乳动物中枢神经系统的可扩增的神经祖细胞或干细胞的方法，以及培养物本身，其中所述细胞保持其分化为神经元、星形胶质细胞、和少突胶质细胞的能力以及其有效分化为少突胶质细胞谱系细胞的能力。此外，本发明还提供了治疗髓磷脂缺失或少突胶质细胞缺失所造成病况的方法，也提供了组合物，所述组合物包含分离的可扩增的神经干细胞或通过本发明方法培养的分离的可扩增的神经干细胞。
- 一种纯化培养大鼠少突胶质前体细胞的培养基及使用方法-201711038733.4
- 郑华;孙艳;周国民 - 复旦大学
- 2017-10-29 - 2019-05-07 - C12N5/079
- 本发明属于生物医学领域，涉及少突胶质前体细胞的培养，具体涉及一种可长期培养大鼠少突胶质前体细胞的培养基配方及其使用方法。首先通过机械离解制作大脑及脊髓细胞悬液，利用原代大鼠少突胶质前体细胞可在多聚赖氨酸包被的培养底物上快速贴壁的特点，获取富含少突胶质前体细胞的贴壁细胞。在含有PDGF、Purmorphamine、N2添加剂及微量血清的培养基中培养，使少突胶质前体细胞大量增殖。5～6天后，撤除培养基中微量血清2～3天，使少突胶质前体细胞粘附力暂时降低，同时结合短暂机械震荡方式选择性分离、纯化少突胶质前体细胞。获得的细胞能够长期维持增殖能力，保持较高纯度，具有分化为成熟少突胶质细胞的能力。
- 一种角膜缘干细胞培养基及培养方法-201910142633.9
- 朱婧 - 山东大学齐鲁医院
- 2019-02-26 - 2019-04-26 - C12N5/079
- 本公开属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种角膜缘干细胞培养基及培养方法。现有的LSCs体外培养方法无一例外的都会面对LSCs扩增能力耗竭及LSCs自发分化的情况，无法获得满足移植需要的LSCs细胞。针对该技术问题，本公开提供了一种能够满足自体移植细胞数量需求的培养方法。本公开研究表明，向LSCs细胞培养基中加入一定浓度的SPARC可以有效延缓体外传代过程中的扩增能力的耗竭，增加克隆形成率，增加增殖活性，容易获得满足移植需要的干细胞数量，提高移植成功率。
- 一种大鼠嗅鞘细胞的分离培养方法-201910163726.X
- 李海明;金保哲 - 李海明
- 2019-03-05 - 2019-04-26 - C12N5/079
- 本发明提供一种大鼠嗅鞘细胞的分离培养方法，包括：取怀孕中后期雌鼠，取出胚鼠，取出所述胚鼠的嗅球，剪碎所述嗅球组织，加入含血清的完全培养基，使用200目筛网过滤，吸出组织液加入离心管中离心、弃上清、重悬，重复三次；加入完全培养基调整细胞浓度，置于恒温培养箱中培养；然后使用差速贴壁法纯化嗅鞘细胞。本发明提供的大鼠嗅鞘细胞的分离培养方法，分离培养的嗅鞘细胞数量多、密度大，生物学活性强。
- 一种SD大鼠星形胶质细胞培养方法-201910019153.3
- 范振峰;扆雪涛;唐梅;李慧;贺永胜 - 云南洛宇生物科技有限公司;青岛市食品药品检验研究院
- 2019-01-09 - 2019-04-23 - C12N5/079
- 发明提供了一种SD大鼠星形胶质细胞培养方法，本方法操作简单，具有较高的可重复性；通过使用专用培养基，星形胶质细胞生产效果好，保证了星形胶质细胞的纯度。本发明能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的SD大鼠星形胶质细胞，便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究星形胶质细胞的生理功能。
- 一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法-201910011662.1
- 范振峰;唐梅;李慧;贺永胜 - 云南洛宇生物科技有限公司
- 2019-01-07 - 2019-04-16 - C12N5/079
- 本发明提供了一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法，本神经元培养方法操作方法简单，具有较高的可重复性；通过使用专用背根神经节细胞培养基，背根神经节细胞生产效果好，保证了背根神经节细胞的纯度。本发明能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的SD大鼠背根神经节细胞，便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究背根神经节细胞的生理功能。
- 小鼠脑中神经细胞的提取分离方法-201811580964.2
- 张媛;冶泽青;李星;杨婷 - 陕西师范大学
- 2018-12-24 - 2019-04-12 - C12N5/079
- 本发明公开了一种小鼠脑中神经细胞的提取分离方法，将离体小鼠脑部用酒精消毒后置于预冷无菌平衡盐溶液D‑hanks中；用手术刀将脑切碎，用0.15％(m/v)的木瓜蛋白酶液消化后，用含脱氧核糖核酸酶I的D‑hanks缓冲盐溶液吹打细胞后，过100μm滤网；然后用细胞分离液percoll差速离心去除髓鞘蛋白，得到单细胞悬液；用红细胞裂解液去除其中血红细胞；利用美天旎miltenyi的磁珠beads纯化得到各种类型的神经细胞。
- 专利分类
