[发明专利]一种西藏灵菇胞外多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种西藏灵菇胞外多糖的提取方法。

背景技术

“西藏灵菇”又名“西藏雪莲”，是源自西藏雪原的特有珍稀菌种，是西藏土生土长的有生命的菌类。它含60％～70％的乳酸菌，其它则是革兰阳性菌、双脂杆菌、酵母菌、芽孢等杂菌，还有一些从没见过的菌类杂菌。乳酸菌是一类能将碳水化合物发酵，并产生大量乳酸的细菌。乳酸菌胞外多糖是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的黏液或荚膜多糖。乳酸菌胞外多糖不仅对提高发酵乳的品质十分有益，如低浓度下增大黏滞性，而且具有改善发酵乳的质地并提高其适口性等方面的特性还具有很多保健功能，如抗肿瘤、降低胆固醇、调节免疫等，这些功能和特性使乳酸菌胞外多糖成为当前的研究热点之一，应用前景广阔。

目前，关于多糖的提取技术通常采用醇沉法，但为了获得更高的多糖提取率和提取效率，近年来很多学者研究了超声波、微波、高压脉冲电场等辅助提取技术，也取得了一定的成果。但是关于采用高压脉冲电场等辅助手段提取乳酸菌胞外多糖还没有相关文献报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种西藏灵菇胞外多糖的提取方法。

一种西藏灵菇胞外多糖的提取方法，包括以下步骤：

1)菌种活化：将西藏灵菇冻干发酵剂在35～40℃脱脂乳中放置24h，反复活化2次；

2)发酵：将脱脂奶粉与水按1:10～1:20的比例配制，再按10％的比例进行接种发酵液，在35～40℃的温度下发酵8～12h；

3)均质：采用50℃，15Mpa,高压脉冲电场处理；

4)离心取上清液：采用6000/min，离心20min；

5)去蛋白：离心后的上清液，加入8g/100ml三氯乙酸，室温下磁力搅拌2h沉淀蛋白，然后进行4℃离心除去蛋白，4℃静置过夜，离心除去沉淀，离心条件为5000r/min，离心15min；上清液浓缩：取离心后的上清液100ml，旋转蒸发器浓缩样液至80ml；

6)醇沉：浓缩后样品按体积比1:3，质量分数为95％的乙醇，搅拌均匀，并置于4℃冰箱中醇沉24h；

7)离心：醇沉后样品移入离心管中，6000r/min，离心15min，弃上清，取黏稠沉淀；

8)冻干：冷冻干燥即得粗多糖。

优选地，步骤3)中所述的高压脉冲电场的电场强度为40KV/cm，脉冲数为8，介质PH值为7时为最佳。

本发明的有益效果是：

乳酸菌胞外多糖具有黏性，尤其是荚膜多糖附着在菌体表面，采用常规方法对多糖提取有一定影响，采用高压脉冲电场处理发酵液，可有效提高多糖的提取率，且作用时间极短，效率更高。

具体实施方式

以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。

实施例1

1、一种西藏灵菇胞外多糖的提取方法，包括以下步骤：

1)菌种活化：将西藏灵菇冻干发酵剂在37℃脱脂乳中放置24h，反复活化2次；

2)发酵：将脱脂奶粉与水按1:10的比例配制，再按10％的比例进行接种发酵液，在37℃的温度下发酵10h；

3)均质：采用50℃，15Mpa,高压脉冲电场处理；

4)离心取上清液：采用6000/min，离心20min；

5)去蛋白：离心后的上清液，加入8g/100ml三氯乙酸，室温下磁力搅拌2h沉淀蛋白，然后进行4℃离心除去蛋白，4℃静置过夜，离心除去沉淀，离心条件为5000r/min，离心15min；上清液浓缩：取离心后的上清液100ml，旋转蒸发器浓缩样液至80ml；

6)醇沉：浓缩后样品按体积比1:3，质量分数为95％的乙醇，搅拌均匀，并置于4℃冰箱中醇沉24h；

7)离心：醇沉后样品移入离心管中，6000r/min，离心15min，弃上清，取黏稠沉淀；

8)冻干：冷冻干燥即得粗多糖。

步骤3)中所述的高压脉冲电场的电场强度为40KV/cm，脉冲数为8，介质PH值为7时为最佳。

2、实验结果

通过将优化高压脉冲电场提取乳酸菌胞外多糖的质量浓度与对照组的比较可知，高压脉冲电场提取西藏灵菇胞外多糖的质量浓度比正常处理的对照组提高了84.30％(见表1)。

表1高压脉冲电场提取乳酸菌胞外多糖的质量浓度与对照组的比较

提取方法胞外多糖的质量浓度/(mg.L^-1)提取率变化/％正常处理751.90高压脉冲电场处理1385.7384.30