[发明专利]L-羟脯氨酸的生物转化方法

权利要求书

1.一种L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，包括以下步骤：以L-脯氨酸、α-酮戊二酸为底物，以含脯氨酸-4-羟化酶的工程菌全细胞为催化剂，再加入表面活性剂和添加剂建立生物转化体系进行转化反应，得到含有L-羟脯氨酸的转化液。

2.根据权利要求1所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述表面活性剂为烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯酰胺、失水山梨醇酯、吐温80、曲拉通X-100中的一种或几种的混合物，所述添加剂为硫酸亚铁、氯化亚铁、硝酸亚铁中的一种或几种的混合物。

3.根据权利要求2所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述表面活性剂为失水山梨醇酯、吐温80、曲拉通X-100按质量比为3-4︰10-40︰1组成，所述添加剂为硫酸亚铁、氯化亚铁、硝酸亚铁按质量比为3-4︰2-5︰1组成的混合物。

4.根据权利要求2所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述表面活性剂为烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯酰胺按质量比为1-9︰1组成。

5.根据权利要求3所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述表面活性剂为失水山梨醇酯、吐温80、曲拉通X-100按质量比为3︰36︰1组成，所述添加剂为硫酸亚铁、氯化亚铁、硝酸亚铁按质量比为3.5︰2.5︰1组成的混合物。

6.根据权利要求1-5任一项权利要求所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述含脯氨酸-4-羟化酶的工程菌全细胞的浓度控制为10-30g/L；所述表面活性剂与含脯氨酸-4-羟化酶的工程菌全细胞的质量比控制为2-6％；所述添加剂与含脯氨酸-4-羟化酶的工程菌全细胞的质量比为1-5％。

7.根据权利要求6所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述含脯氨酸-4-羟化酶的工程菌全细胞的浓度控制为14g/L；所述表面活性剂与含脯氨酸-4-羟化酶的工程菌全细胞的质量比控制 为3.5％；所述添加剂与含脯氨酸-4-羟化酶的工程菌全细胞的质量比为2.3％。

8.根据权利要求7所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，L-脯氨酸与α-酮戊二酸质量比控制为1.5-5︰1，生物转化体系的温度控制为24-50℃；生物转化体系的的pH值控制为4-8；所述转化在摇瓶、烧杯或发酵罐中进行，当在摇瓶中进行时，摇床的转速控制为150-250r/min，当在烧杯或发酵罐中进行时，机械搅拌转速控制为200-500r/min。

9.根据权利要求8所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，L-脯氨酸与α-酮戊二酸质量比控制为2-3︰1，生物转化体系的温度控制为30-40℃；生物转化体系的的pH值控制为6-8；所述转化在摇瓶、烧杯或发酵罐中进行，当在摇瓶中进行时，摇床的转速控制为200r/min，当在烧杯或发酵罐中进行时，机械搅拌转速控制为300r/min。

10.根据权利要求9所述的L-羟脯氨酸的生物转化方法，其特征在于，对含有L-羟脯氨酸的转化液进行纯化，包括如下步骤：

1)将含有L-羟脯氨酸的转化液用盐酸酸化后，加入亚硝酸钠，再用活性炭脱色至无色；

2)将步骤1)中脱色后的含有L-羟脯氨酸的转化液，过离子交换柱，洗脱；

3)将步骤2)洗脱后所得的洗脱液浓缩，用无水乙醇析晶，过滤；

4)将步骤3)过滤后所得的晶体加入无水乙醇，搅拌均匀后静置8-16h，抽滤，烘干，即得精制L-羟脯氨酸晶体。