[发明专利]用于肾癌诊断的miRNA生物标志物及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测，具体涉及用于人肾癌诊断的microRNA生物标志物及检测试剂盒。

背景技术

肾细胞癌(简称肾癌)在成人恶性肿瘤中约占2％-3％，是我国第二常见的泌尿系统恶性 肿瘤，仅次于膀胱癌。手术切除是局限性肾癌最有效的治疗方法，但是很多患者最终仍会复 发。绝大部分肾癌早期无临床症状，一些患者初诊断时已局部进展或远处转移，无法通过手 术根治性切除，且这部分患者预后不佳。所以，对肾癌的早期诊断变得尤为必要。

MicroRNA(miRNA)是最新发现的长约18-25个核苷酸的非编码小分子RNA，在进化 上高度保守，数量约占基因组的1％，现已普遍认为miRNA与人类疾病的发生有密切的联系， 其发现为人们在基因水平认识癌症提供了新思路。MiRNA在转录或转录后水平负调控蛋白质 编码基因的表达：通过与其靶基因mRNA非完全互补或近似完全互补结合，导致mRNA降 解或抑制其翻译。人类基因组约30％的基因受miRNA调控，在细胞的生长、增殖、分化和 凋亡等多方面发挥着重要的生物调节作用。研究已证实miRNA的异常调控与肿瘤形成及进 展关系密切。MiRNA的靶基因多数是参与转录、信号转导、肿瘤发生等生物学效应的基因。 随着miRNA与癌症关系的不断深入研究，发现miRNA并不只是参与了癌症形成的初期阶段， 还涉及到疾病病情变化、对药物的敏感性、患者预后等等多方面。随后基于miRNA的癌症 基因治疗顺势登上舞台，凸显出很大的研究价值。

迄今为止，尚未发现可靠的microRNA生物标志物用于肾癌的诊断。

发明内容

本发明的目的在于提供用于肾癌诊断的microRNA生物标志物及检测试剂盒。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

用于人肾癌诊断的microRNA生物标志物，包括：hsa-miR-10b-5p、hsa-miR-384、 hsa-miR-206、hsa-miR-424-5p和hsa-miR-224-5p；所述hsa-miR-10b-5p的核苷酸序列如 SEQIDNO.1所示；所述hsa-miR-384的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述hsa-miR-206 的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述hsa-miR-424-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示； 所述hsa-miR-224-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。

进一步地，所述microRNA生物标志物为人血清microRNA生物标志物。

一组人肾癌诊断用microRNA引物、探针的组合，包括hsa-miR-10b-5p引物、探针， hsa-miR-384引物、探针，hsa-miR-206引物、探针，hsa-miR-424-5p引物、探针，hsa-miR-224-5p 引物、探针；所述引物包括反转录引物、定量PCR前引物和定量PCR后引物；hsa-miR-10b-5p 的反转录引物序列如SEQIDNO.6所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.7所示，定量 PCR后引物序列如SEQIDNO.16所示；hsa-miR-384的反转录引物序列如SEQIDNO.8所示， 定量PCR前引物序列如SEQIDNO.9所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.16所示； hsa-miR-206的反转录引物序列如SEQIDNO.10所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.11 所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.16所示；hsa-miR-424-5p的反转录引物序列如 SEQIDNO.12所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.13所示，定量PCR后引物序列如 SEQIDNO.16所示；hsa-miR-224-5p的反转录引物序列如SEQIDNO.14所示，定量PCR前 引物序列如SEQIDNO.15所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.16所示；各microRNA 探针的核苷酸序列如SEQIDNO.17所示。

一种人肾癌的肿瘤诊断试剂盒，包括如上所述的microRNA引物、探针的组合。

进一步地，所述的人肾癌的肿瘤诊断试剂盒还包括逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、 DEPC水、Taq酶以及标准品和/或对照品。

本发明的优点：