[发明专利]一种基于OLFM1基因用于结直肠癌预后判断的试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于OLFM1基因用于结直肠癌预后判断的试剂盒，包括以下成分中的至少一种：检测OLFM1基因mRNA表达水平的引物对、检测OLFM1基因启动子甲基化水平的引物对和检测OLFM1蛋白含量的试剂。通过对结直肠正常组织和癌组织中的OLFM1基因mRNA及编码蛋白的表达水平检测，发现OLFM1在结直肠癌病人的肿瘤组织中表达显著下调，而此下调与基因启动子区域CpG岛高度甲基化密切相关。在肠癌细胞中敲低OLFM1发现癌细胞的增殖能力和迁移能力显著增加。基于以上发现开发得到一种用于结直肠癌预后判断的试剂盒，其对于结直肠癌患者风险评估和预后预测有极其重要的意义。

技术领域

本发明属于分子检测领域，具体涉及一种基于OLFM1基因用于结直肠癌预后判断的试剂盒。

背景技术

结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是目前世界上癌症相关主要死亡因素之一。结肠癌和直肠癌的五年生存率分别是65.4％和67.7％。

研究发现，有关基因(包括KRAS、TP53、APC)在结直肠癌肿瘤组织中发生突变或启动子高甲基化。结直肠癌的异常是连续被基因组新技术发现的，同时这些新技术有利于诊断甚至治疗。例如，RNA测序发现在10％的结肠癌中存在包括R-spondin家族成员RSPO2和RSPO3的重复基因融合，并且在PTPRK-RSPO3融合基因阳性的结直肠癌病人中进行抗-RSPO3治疗能够抑制肿瘤的增殖和促进分化。

在结直肠癌和子宫内膜癌中有18％的患者有RNF43突变；在粪便中进行KRAS突变、异常NDRG4和BMP3甲基化和β-actin基因定量检测，结合血红蛋白免疫检测，对于结直肠癌的筛查是很有价值的。因此，探索更多的诊断和治疗靶点以及阐述结直肠癌的生长和转移的分子机制是十分重要的。

含Olfactomedin域的蛋白家族包括至少13个成员，它们在神经发生、细胞间黏附、细胞周期调控以及肿瘤发生中发挥着重要作用。OLFM1是这个超家族中的一个成员，它有一个保守的250个氨基酸的olfactomedin域。OLFM1是一种高表达的神经糖蛋白，其对于神经系统和心脏的发展十分重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于OLFM1基因用于结直肠癌预后判断的试剂盒。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种基于OLFM1基因用于结直肠癌预后判断的试剂盒，包括以下成分中的至少一种：

(1)检测OLFM1基因mRNA表达水平的引物对，即SEQ ID No.1和SEQ ID No.2；

(2)检测OLFM1基因启动子甲基化水平的引物对，即SEQ ID No.5和SEQ ID No.6，或者是SEQ ID No.9和SEQ ID No.10；

(3)检测OLFM1蛋白含量的试剂，优选抗OLFM1蛋白的抗体；

所述的试剂盒还包括人正常的结直肠组织或细胞的总RNA或DNA，作为对照用，以判断基因表达水平和启动子甲基化水平的高低；

所述的试剂盒还包括PCR酶、PCR缓冲液、dNTPs或荧光底物中的一种以上；

所述的荧光底物优选Syber Green或荧光标记的探针。

本发明使用Genesis软件分析Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中编号为GSE32323的来自于结直肠癌患者的17对肿瘤组织和正常组织的芯片结果，汇总并比较含olfactomedin域的蛋白家族的13个成员的表达情况。发现在含olfactomedin域蛋白家族中的13个成员中，结直肠癌组织中OLFM1的表达水平显著低于癌旁正常组织，其统计差异最大。