[发明专利]鼠源抗人IgE单克隆抗体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种鼠源抗人IgE单克隆抗体的制备方法，所述方法包括应用原核表达系统表达的含IgE Fcε3-4蛋白片段的融合蛋白免疫小鼠，随后通过杂交瘤方法制备鼠源抗人IgE单克隆抗体；其中，所述IgE Fcε3-4蛋白片段为由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列在所述原核表达系统中表达的蛋白；

所述融合蛋白为IgE Fcε3-4蛋白片段和载体表达的蛋白构成的融合蛋白。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述载体表达的蛋白为载体pET32(+)表达的蛋白。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列是以SEQ ID NO:6及SEQ ID NO:7为引物，及以CRL8033cDNA为模板扩增所得。

4.一种鼠源抗人IgE单克隆抗体，其中，该抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，且该抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

5.编码权利要求4所述的鼠源抗人IgE单克隆抗体的基因。

6.权利要求5所述的基因，编码轻链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；编码重链可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

7.含权利要求5或6所述基因的载体。

8.权利要求7所述的载体，所述载体为原核表达载体。

9.权利要求8所述的载体，所述载体为pET32(+)。

10.含有权利要求5所述基因或含有权利要求7所述载体的细胞。

11.一种产生权利要求4所述鼠源抗人IgE单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合人IgE的生物活性片段的方法，该方法包括如下步骤：(a)提供权利要求7所述载体；(b)用步骤(a)所述的载体转化原核细胞；(c)在适合所述单克隆抗体表达的条件下培养步骤(b)所得的原核细胞；和(d)分离纯化获得所述单克隆抗体。

12.一种检测IgE水平的试剂盒，其含有权利要求4所述的鼠源抗人IgE单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合人IgE的生物活性片段。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，所述试剂盒还含有第二抗体和用于检测的酶或荧光或放射标记物，以及缓冲液。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其中，所述第二抗体为抗权利要求4所述鼠源抗人IgE单克隆抗体的抗抗体。